Analyses Des HE [PDF]

Zitiervorschau

Projet de Fin d’Études État et lieu des plantes aromatiques et médicinales chez les herboristes du Nord du Maroc et caracterisation du Laurus nobilis

Préparé par : JELLOULI Kaoutar

Encadré par : M.LAGLAOUI Amin (FSTT)

AKHRIF Ibtihal

M.ZANTAR Saïd (INRA)

Soutenu le 22 juin 2016 en vue de l’obtention du Licence Sciences et techniques

Filière : Biotechnologie végétale

Année universitaire : 2015/2016

W°w|vtvxá A l’aide de dieu tout puissant, qui m'avoir donnée la force et la patience, j’ai pu réaliser ce travail que je dédie : Aux étoiles qui éclairent ma vie, à ma source de tendresse :

Ces deux êtres qui m’ont su m’éduquer, qui s'étaient toujours sacrifiés pour me voir réussir qui étaient toujours derrière moi et qui m’ont poussé à aller de l’avant. Que Dieu vous préservent et vous procurent bonne santé et longue vie. A mon cher oncle par alliance : Redouane Et ma chère tante : Nadia Que vous m’avez toujours soutenu durant toutes mes études Sachez que Vous occupez une place particulière dans mon cœur A mes chers amis (Aziza, Mounia, Youssra, Ali, Rida, Tiko, Othmane, Ali…) Qui m’ont permis d’oublier les moments de stress et de découragement, Qui m’ont apporté leurs aides En souvenir de nos éclats de rire et des bons moments, en souvenir de tout ce qu’on a vécu ensemble. A mon binôme Kaoutar A tous ceux qui me sont chers

Akhrif Ibtihal

W°w|vtvxá Que ce travail témoigne de mes respects : A Dieu qui m’a donné la force d’affronter chaque jour A mes parents : Grâce à leurs tendres encouragements et leurs grands sacrifices, ils ont pu créer le climat affectueux et propice à la poursuite de mes études. Aucune dédicace ne pourrait exprimer mon respect, ma considération et mes profonds sentiments envers eux.

A mes frères Omar et Adil. Pour leur amour infini et leur soutien tout au long de ce parcours

A la famille Akhrif Pour leur soutien et leur gentillesse

A mes amis Ibtihal, Youssef, Houria, Safae, Nabila, Fadoua, Imane et à ma chère famille Dont l’amitié et le soutien, n’ont jamais défailli A tous mes professeurs : Leur générosité et leur soutien m’oblige de leurs témoigner mon profond respect et ma loyale considération.

Jellouli Kaoutar

exÅxÜv|xÅxÇà Un stage n’est jamais un travail individuel, il s’inscrit dans une démarche globale de recherche qui bénéficie des travaux déjà réalisés, est en relation avec les travaux en cours et sera peut être repris par la suite. Nous tenons à remercier en tout premier lieu notre encadrant Mr. LAGLAOUI Amin, Enseignant à la Faculté des sciences et techniques Tanger, qui a dirigé ce travail de recherche de Licence. Nous avons eu l’honneur d’être parmi vos élèves et de bénéficier de votre riche enseignement. Vos qualités pédagogiques et humaines sont pour nous un modèle. Votre gentillesse, votre patience, et votre disponibilité permanente ont toujours suscité notre admiration. Veuillez bien monsieur recevoir notre remerciement pour le grand honneur que vous nous avons fait d’accepter l’encadrement de ce travail. Nos

remerciements

s'adressent

également

à

Mr.

BAKKALI

Mohammed et Mr. ARAKRAK Abdelhay, Enseignants à la Faculté des sciences et techniques Tanger, pour avoir accepté de juger ce travail. Nous adressons nos reconnaissances à tous nos enseignants pendant nos études notamment ceux du Licence. Nous exprimons notre reconnaissance à Mr. ZANTAR Said encadreur de stage à L’ INRA pour nous donné ses conseils et ses avis. Nous le somme aussi reconnaissant pour le soutien technique qu'il nous a apporté tout en répondant à nos interrogations à tout moment. Nos profondes

gratitudes

s’orientent

vers

Mr

ZERROUK

Mounir,

Enseignant à la Faculté polydisciplinaire de Larache pour ses judicieux conseils et son support permanent. Spéciale remerciement à notre amie Mme. SSEBBAGH Chaimae, étudiant du Master à la Faculté des sciences et techniques Tanger spécialité Chimie, pour le temps qu'il a passé avec nous pour discuter nos propositions et pour ses aides. Ainsi pour l'intérêt qu'il a porté à notre travail et ses conseils sur nos propositions, Nous la remercie aussi pour ses conseils occasionnels et ses aides. Nos remerciements vont aussi à Mr. JELLOULI Omar doctorant à la

Faculté

des

sciences

et

techniques

Tanger

département

mathématiques appliquées et informatique pour le temps qu'il a passé avec nous pour discuter nos propositions et pour son aide et ses remarques. Enfin,

nous

présentons

nos

sincères

reconnaissances

et

nos

remerciements à tous ceux qui ont participé de près ou de loin à la réalisation de ce travail.

Résumé Ce rapport a été réalisé à la Faculté des Sciences et Techniques de Tanger (FSTT), et en collaboration avec le Centre Régional de d la Recherche en Agronomie de Tanger (CRRA). Il comporte deux volets : Le premier a été consacré à l’étude d’état et lieu des plantes aromatiques et médicinales d’origine du nord du Maroc chez les herboristes de la région de Tanger –Tétouan. Le deuxième a été consacré à l’étude de l’huile essentielle essentielle obtenue par hydrodistillation des feuilles de Laurus nobilis,, provenant de la région de Moulay Abdeslam,, cette huile a été analysée par Chromatographie en phase gazeuse couplée à la Spectrométrie de masse. L’huile extraite de sente 25 composés chimiques avec un rendement de (0,66%). Les matière végétale étudiée présente entifiés dans l’H l’H.E sont : (1,8 Cineole (42%), Caryophyllene (11,74%), composés majoritaires identifiés α -Terpinyl acétate (9,98%). L’étude de l’activité anti-oxydante oxydante par le test du DPPH a révélé un pouvoir antioxydant maximal (87%) obtenu à la concentration [1000mg/l] de l’extrait méthanolique. thanolique. L’étude de l’activité l’ essentielle de Laurus nobilis sur des souches ctivité antibactérienne de l’huile Staphylococcus aureus et Enterococcus faecium) et gram négatif bactériennes gram positif (Staphylococcus (Escherichia coli et Salmonella seftemberg), montre qu’elle possède un effet antibac antibactérien important surtout sur deux souches de bactéries à savoir : E. coli et S. aureus. nobilis, nord du Maroc. Mots-clés : plantes aromatiques et médicinales, huile essentielle, Laurus nobilis

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Sommaire Résumé

Liste des tableaux Liste des figures Liste des abréviations Introduction………………………………………………………….………………...……………1 Chapitre 1 : Etude bibliographique…………………………………………………………………2

I. Les plantes aromatiques et médicinales ......................................................................................2 1. Définitions des plantes aromatiques et médicinales ...............................................................2 2. Domaines d’application des plantes médicinales ...................................................................2 3. Plantes aromatiques et médicinales au Maroc ........................................................................3 II. Les huiles essentielles ...............................................................................................................4 1. Définition ...............................................................................................................................4 2. composition chimique générale des huiles essentielles ..........................................................5 3. Techniques d’extraction des huiles essentielles ....................................................................5 5. Les activités biologiques des huiles essentielles ....................................................................9 III. L’enquête ................................................................................................................................11 1. À propos ...............................................................................................................................11 2. Région d’étude .....................................................................................................................11 3. Objectifs ................................................................................................................................11 IV. La plante à étudier .................................................................................................................11 1. Généralités ............................................................................................................................11 2. Origine et distribution ...........................................................................................................12 3. Description botanique ...........................................................................................................12 4. Classification botanique: ......................................................................................................13 Chapitre 2 : Matériel et Méthodes................................................................................................14 I. Matériel Biologique: .................................................................................................................14 1. Matériel végétal ....................................................................................................................14 2. Matériel microbiologique .....................................................................................................15

II. L’extraction d’huile essentielle ...............................................................................................15 III. Détermination d’humidité et du rendement en huiles essentielles .........................................16 1. Calcul d’humidité .................................................................................................................16 2. Calcul du rendement en huile essentielle .............................................................................17 IV. Analyse chimique du H.E par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CPG/ SM) ...................................................................................................................17 V. Indices physico-chimiques .....................................................................................................18 1. Les propriétés organoleptiques ............................................................................................18 2. Le PH ...................................................................................................................................18 3. Indice d’acide .......................................................................................................................19 4. Pouvoir rotatoire ..................................................................................................................19 VI. Évaluation de l’activité antioxydante ....................................................................................20 VII. Évaluation de l’activité bactérienne du H.E .........................................................................20 1.

Milieu de culture: ..............................................................................................................20

2. Obtention des suspensions bactériennes ...............................................................................21 3. Méthodes de diffusion sur disques ......................................................................................21 Chapitre 3 : Résultats et Discussion ............................................................................................22 I.L’enquête ...................................................................................................................................22 1. Commentaires ......................................................................................................................27 2. Remarques ...........................................................................................................................27 II. Taux d’humidité et rendement en huiles essentielles ..............................................................28 1. Rendement en huile essentielle ............................................................................................28 2. Taux d’humidité....................................................................................................................28 III. Indices physico-chimiques .....................................................................................................29 VI. Analyse de la composition chimique de l’huile essentielle ...................................................31 V. Activité anti-oxydante .............................................................................................................33 VI. Activité antibactérienne ........................................................................................................34 Conclusion et perspectives.............................................................................................................38 Références bibliographiques .........................................................................................................39 Annexes ...........................................................................................................................................43

Liste des tableaux Tableau 1 : Les principales plantes aromatiques et médicinales exploitées au nord du Maroc. Tableau 2 : Classification botanique de Laurus nobilis L. Tableau 3 : Les souches bactériennes testées. Tableau 4 : Résultats de la détermination des indices physico-chimiques des H.E. Tableau 5 : Composition chimique (en %) des différents composés identifiés l’HE étudiée. Tableau 6 : L’activité anti-oxydante de l’H.E. Tableau 7 : L’activité anti-oxydante de la Vitamine C. Tableau 8 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis L sur les souches bactériennes testées. Tableau 9 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du L. nobilis sur les souches testées.

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Liste des figures Figure 1 : Montage d’hydrodistillation (Clevenger). Figure 2 : Montage d’entraînement à la vapeur d’eau. Figure 3 : Schéma du montage de l’expression à froid. Figure 4 : Aspect morphologique de Laurus nobilis. Figure 5 : Situation géographique de la région de la récolte. Figure 6 : Montage d’hydro-distillation du type Clevenger. Figure 7 : Chromatographie en Phase Gazeuse Couplée à la Spectrométrie de Masse (GC/MS). Figure 8 : Diffusion sur disques. Figure 9 : Teneur en eau des trois différentes parties de la plante. Figure 10 : Activité anti-oxydante de l’huile essentielle de L.nobilis comparée à Celui de la vitamine C à des concentrations allant de 100 à 1000 Mg/L. Figure 11 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis sur les Souches testées.

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Liste des abréviations

ADN : Acide Désoxyribonucléique. AFNOR : Association Française de la Normalisation. CG/SM : Couplage chromatographie en phase gazeuse / spectrométrie de masse. CPG : Chromatographie en phase Gazeuse. DPPH : 1,1-dipheny1-2-picrylhydrazyle. E.Coli : Escherichia coli. H.E : Huille essentielle. L. Nobilis : Laurus Nobilis. MHA : Muller Hinton Agar. NB : Nutritif Broth. NIST : National Institute of Standards and Technology. OMS : Organisation Mondiale de la Santé. PAMs : Plantes Aromatiques et Médicinales. S. Aureus : Staphylococcus aureus.

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Avant propos L’institut national de recherches agronomiques (INRA) est placé au service du développement agricole et relève de Ministère de l’Agriculture et de la Pêche Maritime. Elle est représentée par dix centres régionaux parmi lesquels il y a le centre régional de la recherche agronomique de Tanger qui couvre la zone d’action des Directions Provinciales d’Agriculture (DPA) de Tanger, Tétouan , Chefchaouen, Al Hoceima et la partie nord de l’office régional de mise en valeur agricole de (ORMVA) Loukkos. Le centre régional de la recherche agronomique de Tanger est organisé en deux unités de recherche, l’unité de

recherches sur les techniques nucléaires, l’environnement et la qualité et,

l’unité de recherche sur la Production Animale. Il inclut un service administratif, un service de recherche de développement et le domaine expérimental de Boukhalef. Notre stage a été réalisé à La station d’ionisation de BOUKHALEF (SIBO). La station d’ionisation de BOUKHALEF SIBO est une unité de traitement par rayonnement ionisant des produits alimentaires et non alimentaires. Elle est gérée

par le

programme des techniques nucléaires au centre régional de la recherche agronomique du Rif à Tanger. Cette station créée en 1995, est équipée d’une source radioactive de cobalt 60. La vocation de la station SIBO est de traiter les produits alimentaires d’origines animales et végétales en vrac ou emballés ainsi que d’autres produits comme les produits pharmaceutiques et médicaux.

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Introduction Les plantes médicinales constituent un patrimoine précieux pour l’humanité et plus particulièrement pour la majorité des communautés démunies des pays en voie de développement. Elles permettent d’assurer le soin de la santé primaires et subsistances. Elles utilisent la plupart des espèces végétales (ligneuses, herbacées, …) comme médicaments. Une croyance bien répondue est que ‘‘toute plante soigne’’. Selon l’OMS, plus de 80% des populations africaines ont recours à la médecine et à la pharmacopée traditionnelle pour faire face aux problèmes de sante. Le continent africain regorge de plantes médicinales très diversifiées. En effet, sur les 300.000 espèces végétales recensées sur la planète plus de 200.000 espèces vivent dans les pays tropicaux d’Afrique et ont des vertus médicinales {1}. Le Maroc par sa position biogéographique, offre une très grande diversité écologique et floristique. Il est l’un des pays méditerranéens qui ont une longue tradition médicale et un savoirfaire traditionnel a base de plantes médicinales {2}. Par ailleurs, une forte tradition ethnomédicinal et encore vivante dans toutes les régions du Maroc et nul ne soupçonne la richesse du savoir ethno-médicinal accumule durant des siècles et qui, de plus en plus risque de ne plus être transmis, en cas ou aucune sauvegarde n’est entreprise. La flore médicinale marocaine reste jusqu’à présent connue de manière simplement empirique. Devant cette parcelle de notre savoir, plusieurs volontés concourent, actuellement, à la préserver et à la mettre en valeur. Par ailleurs, des enquêtes ethnobotaniques contribuent, de leurs parts, à rassembler et constituer une source d’information très précieuse, prête à être exploitée sur le plan scientifique. Dans le cadre de notre projet de fin d’étude et vu la variété de ces plantes présentes dans notre région, une enquête sur l’état et le lieu des Plantes Aromatiques et Médicinales (PAM) est proposée chez les herboristes de la région Tanger-Tétouan, ceci nous a amené aussi à nous pencher sur l‘étude des caractères physico-chimiques, activité anti-oxydante et l’activité antibactérienne d’une huile essentielle obtenue par hydrodistillation à partir d’une plante aromatique et médicinale de la région de Moulay Abdeslam (Nord du Maroc) : c’est le Laurus nobilis, qu’elle est une épice utilisé surtout dans la cuisson des aliments ou pour l’assaisonnement et elle possède différentes caractéristiques aromatique culinaire et médicales.

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Étude Bibliographique

Chapitre 1 Étude bibliographique

I. Les plantes aromatiques et médicinales : 1. Définitions des plantes aromatiques et médicinales : Plantes médicinales : La plante médicinale est une plante utilisée pour ses propriétés thérapeutiques, qui contient une ou des substances susceptibles d’un traitement médical d’une maladie à réduire l’incidence de la ou des matières premières utilisées dans la préparation de matériel médical. Leur efficacité relève de leurs composés très nombreux et très variés en fonction des espèces, qui sont autant de principes actifs différents {3}.

Plantes aromatiques : La plante aromatique est toute plante contient suffisamment de molécules aromatiques avec plusieurs organes producteurs comme les feuilles, les fruits, les racines, l’écorce, … etc. {3}.

2. Domaines d’application des plantes médicinales : Les substances naturelles issues des végétaux ont des intérêts multiples mis à profit dans l’industrie : en alimentation, en cosmétologie et en pharmacie. - En pharmacie : on utilise une forte proportion de médicaments d’origine végétale, selon l’OMS 75% des médicaments ont une origine végétale et 25% d'entre eux contiennent au moins une molécule active d'origine végétale. Parmi les composés utilisés dans la médecine, on retrouve dans une grande mesure les métabolites secondaires. - En alimentation : les épices et les herbes sont très utilisées dans l’alimentation. La notion de flaveur des épices et aromates recouvre l’ensemble des perceptions olfactogustatives. Ces perceptions résultent de stimulations générées par un multiple des composés organiques dont certains sont volatils : les huiles essentielles; les autres non volatils sont plus particulièrement responsables de la saveur et de la couleur {4}.

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Étude Bibliographique

- En agriculture : les huiles de certaines plantes ont des utilisations dans le contrôle de certains insectes et nématodes {5}. - En cosmétique : beaucoup de plantes médicinales sont à l’origine des produits de beauté parfums et articles de toilettes, produits d’hygiène {6}.

3. Plantes aromatiques et médicinales au Maroc : 3.1. Généralités : L'importance du secteur des PAM ne cesse d'augmenter en relation, d'une part, avec la forte augmentation de la demande mondiale enregistrée ces dernières décennies pour les PAM et leurs produits dérivés et, d'autre part avec le nombre croissant d'utilisateurs et la diversité des domaines de leur valorisation. Situé à l'angle Nord-ouest du continent Africain entre 21° et 36° de latitude de Nord et entre le 1er et le 17ème degré de longitude Ouest, et avec une façade maritime de 3446 Km de long s'ouvrant sur la méditerranée et l'océan atlantique {7}. Le Maroc jouit d'une position privilégiée et offre une gamme variée de bioclimats permettant l’installation d’une flore riche (plus de 4200 espèces) et une diversité de ressources phylogénétiques en PAM (600 espèces) {6} Le Maroc est un producteur traditionnel de PAM, et un fournisseur exclusif de plusieurs huiles essentielles comme l’armoise, et la camomille sauvage {8}. Il est le 12ème exportateur mondial avec près de 30 millions de dollars pour les PAM cultivées et 40 millions de dollars pour celles cueillies {9}. Cette production se révèle ainsi riche et diversifiée, ce qui constitue un important atout pour l’établissement et le développement du secteur. Plusieurs produits sont connus sur le marché international comme étant des produits typiquement marocains. Cela signifie que la profession d’exploitation des PAM au Maroc, malgré ses faiblesses, a réussi à introduire sur le marché international plusieurs produits nouveaux {10}.

3.2. Plantes aromatiques et médicinales du nord du Maroc : Grâce aux conditions climatiques et géomorphologiques, le nord du Maroc présente une très grande diversité spécifique de plantes spontanées des zones méditerranéennes et qui ont un potentiel important en plantes aromatiques et médicinales souvent endémiques. Ce caractère

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Étude Bibliographique

orographique original lui confère des conditions pédoclimatiques qui se reflètent sur sa végétation très diversifiée {7}. Tableau 1 : Les principales plantes aromatiques et médicinales exploitées au nord du Maroc {3} Nom scientifique

Nom français

Nom vernaculaire

Origanum compactum

Origan

Sahtar, Zaatar

Mentha pulegium

Menthe pouliot

Fleyou

Lavandula stoechas

Lavande

Halhal

Myrtus communis

Myrte

Rayhane

Eucalyptus camaldulensis

Eucalyptus

Kellette

Rosmarinus officinalis

Romarin

Azir

Mentha rotundifolia

Menthe à feuilles rondes

Mchechtro

Artemisia absinthium

Absinthe

Chiba

Rubus ulmifolius .schott

Ronce

EL Olique

Pistacia lentiscus

Pistachier Lentisque

Dro

Laurus nobilis

Laurier noble

Rande

Calamintha ascendens

Sarriette ascendent

Mantha

II. Les huiles essentielles : 1. Définition : Une huile essentielle est un extrait volatile odorant, de composition chimique complexe, obtenu à partir d'une matière première végétale botaniquement définie, soit par entrainement à la vapeur d'eau, soit par distillation sèche, soit par un procédé mécanique sans chauffage {11}. En 1987 ; l’AFNOR (Association Française de la Normalisation) donne une définition officielle des huiles essentielles : « Produit obtenu à partir d’une matière première végétale, soit par entrainement à la vapeur d’eau, soit par des procédés mécaniques à partir de l’épicarpe des Citrus, soit par distillation à sec. L’huile essentielle est ensuite séparée de la phase aqueuse par procédés physiques » {12}.

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2. Composition chimique générale des huiles essentielles : La composition chimique de l'huile essentielle est souvent influencée par plusieurs facteurs externes comme : les conditions climatiques, géographiques et agronomiques qui peuvent intervenir dans la composition chimiques de l’huile essentielle, mais il est généralement admis que les constituants des huiles essentielles sont repartis en trois groupes provenant de trois voies de biosynthèse : •

Le groupe des terpénoïdes ;

•

Le groupe des phénylpropanoïdes ;

•

Le groupe des lipides, issus de la dégradation d’acides gras et de terpènes {13}.

3. Techniques d’extraction des huiles essentielles : Le choix de la technique dépend principalement de la matière première: son état originel, ses caractéristiques et sa nature proprement dite. Le rendement « H.E/matière première végétale » peut être extrêmement variable selon les plantes {14}. Parmi de nombreuses techniques d’extraction des huiles essentielles, la distillation est la méthode la plus ancienne et également la plus utilisée. D’autres techniques plus récentes ont été développées afin d’améliorer le rendement ou la qualité des huiles essentielles extraites, diminuer le temps d‘extraction, réduire la quantité du solvant utilisé et accélérer la cinétique d‘extraction {15}.

3.1. La Distillation : Dans un premier temps, l’extraction des huiles essentielles s’est faite en plongeant la matière première dans l’eau qu’on porte ensuite à ébullition, il s’agit de :

L’HYDRODISTILLATION: La matière première est en contact direct avec l’eau. Elle peut flotter à la surface ou être immergée, en fonction de sa densité et de la quantité traitée. Le chauffage de l’ensemble est effectué à la base de l’alambic, à l’aide de combustibles divers comme le bois (alambic à feu nu) ou par la vapeur surchauffée injectée dans une double enveloppe entourant l’alambic.

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Étude Bibliographique

La présence de l’eau engen gendre notamment des phénomènes d’hydrolys lyse. Ces phénomènes d’hydrolyse seront d’autant plus us importants quand la durée d’hydro-distillatio ation sera longue. Par ailleurs, dans le cas de l’alambic ic à feu nu, la matière première située à la supe perficie peut connaître une certaine surchauffe, ce quii est négatif pour l’huile essentielle ainsi obtenue. ob Étant gorgée d’eau, le produit solide résiduell n’est n’ pas utilisable comme combustible {15}.

Figure 1 : Montage M d’hydrodistillation (Clevenger) {16} 6}

LA VAPO-DISTILLA LATION : A la différence de l’hyd hydro-distillation, cette technique ne met pas as en contact direct de l’eau et la matière végétale à traite aiter. De la vapeur d’eau fournie fou par une chaudière traverse la matière ère végétale située au dessus d’une grille. Durant le passage pa de la vapeur à travers le matériel, les cellules éclatent et libèrent l’huile essentielle qui est es vaporisée sous l’action de la chaleur pour ur former un mélange « eau + huile essentielle ». Le mélange mé est ensuite véhiculé vers le condenseur eur et l’essencier avant d’être séparé en une phase aqueus euse et une phase organique : l’huile essentielle lle {17}.

GIE VEGETALE PFE – LICENCE BIOTECHNOLOGIE

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Figure 2 : Montage d’entraînement à la vapeur d’eau {17}

3.2. L’expression à froid : Ce mode d’obtention ne s’applique qu’aux fruits d’agrumes par des procédés mécaniques à température ambiante. L'expression à froid consiste à soumettre la substance végétale à une forte pression à l'aide d'une presse hydraulique {14}.

Moteur Aiguille

Collecteur

Figure 3: Schéma du montage de l’expression à froid {18}

3.3. Distillation sèche : L’huile essentielle est obtenue par distillation des bois, écorces ou racines, sans addition d’eau ou de vapeur d’eau {14}.

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Étude Bibliographique

4. Méthodes d’analyses des huiles essentielles : L’analyse chimique des huiles essentielles permet d’identifier et quantifier ses constituants. Les progrès des méthodes analytiques permettent d’identifier rapidement un très grand nombre de composés chimiques. En effet, la CPG est la méthode de référence utilisée pour analyser les huiles essentielles {19}, elle permet l’analyse de mélanges, qui peuvent être très complexes, de nature et de volatilité très variées {20}.

La chromatographie en phase gazeuse (CPG) : La CPG est une méthode d’analyse par séparation qui s’applique aux composés gazeux ou susceptibles d’être vaporisés par chauffage sans décomposition. C’est la technique de séparation la plus utilisée pour l’analyse de la composition chimique des huiles essentielles, car elle permet d’effectuer l’individualisation des constituants à partir d’échantillons de l’ordre du millilitre voire du microlitre. Les progrès technologiques réalisés dans le domaine des colonnes capillaires, des phases stationnaires et des détecteurs à ionisation de flamme ont contribué à rendre la CPG incontournable pour l’analyse des huiles essentielles {21}. Chaque constituant est caractérisé par un indice calculé à partir d’une gamme d’alcanes ou plus rarement d’esters méthylique linéaires, dans les mêmes conditions d’analyse des échantillons {16} ou en programmation de la température {23}. Les temps de rétention, bien que spécifiques d’un composé, ont tendance à varier d’une analyse à l’autre, notamment du fait du vieillissement des colonnes {24}.

Couplage chromatographie en phase gazeuse / spectrométrie de masse (CG/SM) : La simplicité du couplage entre ces deux techniques, les progrès accomplis dans le traitement en temps réel du signal, la constitution de banques de données de spectre de masse et le développement des algorithmes de comparaison entre le spectre d’un composé inconnu avec ceux répertoriés dans la banque sont à l’origine de la généralisation de l’usage de la CG/SM dans les laboratoires d’analyse des composés aromatisants. La CG sur colonne capillaire constitue une excellente méthode d’introduction de l’échantillon dans le spectromètre de masse. Ainsi, la colonne capillaire est directement couplée à la source d’ions permettant l’ionisation en impact électronique {19}.

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5. Les activités biologiques des huiles essentielles : L’activité des H.E et des extraits aromatique est souvent réduite à l’activité de leurs composés majoritaires, ou ceux susceptibles d’être actifs. Évalués séparément sous la forme de composés synthétiques, ils confirment ou infirment l’activité des H.E de compositions semblables. Il est cependant probable que les composés minoritaires agissent de manière synergique. De cette manière, la valeur d’une H.E tiennes à l’intégrité de ses composants et non seulement à ses composés majoritaires {26}. Les composés chimiques de plus grande efficacité et à plus large spectre sont les phénols, les alcools, les aldéhydes, les cétones et plus rarement des terpènes {27}.

5.1. Activité anti-oxydante : Le phénomène d'oxydation consiste à rouiller les métaux, flétrir les légumes et les fruits, rancir les graisses et modifier le goût et la couleur des aliments. De point de vue chimique l'oxydation est générée par la présence des radicaux libres; espèces chimiques instable, neutres ou chargées qui cherchent toujours à récupérer un électron dans sa couche externe pour retrouver son état stable, très rapide et se propage en cascade. Ils pointent surtout les corps gras comme les phospholipides des membranes cellulaires ainsi que les protéines. L’oxydation entraine une modification ou une perte d'activité biologique de la molécule, en cas d’enzyme, ce qui conduit à des désorganisations cellulaires irréversibles qui provoque la mort cellulaire. Il en est de même quand l'oxydation touche l'ADN {29}. Les antioxydants sont des molécules qui fixent les radicaux libres et protègent les protéines essentielles et qui diminuent ou empêchent l'oxydation d'autres substances {30}. La méthode d’évaluation de l’activité anti-oxydante est :

Test de réduction du DPPH : Le DPPH ou 1,1-dipheny1-2-picrylhydrazyle agit en tant qu'un radical libre stable efficace réduit par un antioxydant, montrant un spectre d'absorption à 517 nm avec une couleur violette, la réduction de ce radical nous donne la coloration jaune. La méthode est basée sur la dégradation du radical DPPH. Un antioxydant aura la capacité de donner un électron singulier au radical synthétique DPPH de coloration violette pour le stabiliser

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Étude Bibliographique

en DPPH de coloration jaune. {31}, cette activité est facilement mesurable par spectrophotométrie à 517 nm. Dans ce test les antioxydants réduisent le diphénylpicryl-hydrazyle ayant une couleur violette en un composé jaune, le diphénylpicryl-hydrazine, dont l'intensité de la couleur est inversement proportionnelle à la capacité des antioxydants présents dans le milieu à donner des protons {32}.

5.2. Activité antibactérienne : Du fait de la variabilité des quantités et des profils des composants des huiles essentielles, il est probable que leur activité antimicrobienne ne soit pas attribuable à un mécanisme unique, mais à plusieurs sites d’action au niveau cellulaire. De façon générale, il a été observé une diversité d’actions toxiques des huiles essentielles sur les bactéries comme la perturbation de la membrane cytoplasmique, la perturbation de la force motrice de proton, fuite d’électron et la coagulation du contenu protéique des cellules. Le mode d’action des huiles essentielles dépend en premier lieu du type et des caractéristiques des composants actifs, en particulier leur propriété hydrophobe qui permet de pénétrer dans la double couche phospholipidique de la membrane de la cellule bactérienne. Cela peut induire un changement de conformation de la membrane {33}. Les méthodes d’évaluation de l’activité antibactérienne sont :

Méthode des disques : Cette méthode est nommée aussi technique de l’antibioaromatogramme a été pratiqué pour tester et mettre en évidence l'activité antimicrobienne {34}. Une suspension bactérienne de 18 à 24 heures de chaque souche microbienne est préparée avec le bouillon nutritif dilué. Des boîtes de pétri contenant la gélose sont inoculées par la suspension bactérienne, les boîtes sont ensuite séchées sous hotte à flux laminaire. Un disque de papier filtre de 6 mm de diamètre est arrosé de l'huile essentielle puis conservé sur une boîte de pétri et le tout est entretenu pendant 18 à 24 heures à 30°C pour les bactéries gram négatif et 37°C pour les bactéries gram positif. Après 18 à 24 heures d'incubation, on remarque la constitution d’une zone ou un halo clair autour du disque si l'huile essentielle entrave le développement microbien. Plus la zone d'inhibition est importante, plus le germe est sensible.

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Étude Bibliographique

Méthodes des puits : Cette méthode assure une diffusion radiale de l'H.E à l’aide d'un puits contenant l’huile essentielle à étudier en donnant une zone d'inhibition claire et facilement mesurable. La méthode consiste à créer un trou circulaire vertical dans le milieu gélosé. Chaque puits est remplis l’huile solubilisé dans un solvant spécifique {35}.

III. L’enquête: 1. À propos : Au cours de notre enquête, une série de visites ont été effectuées chez des herboristeries à la fois traditionnelles et sophistiquées, à l’aide d’un questionnaire préétablie (Annexe 2) comportant des questions sur l’identité vernaculaire de la plante ainsi que la partie utilisée, les modes de préparation les usages thérapeutiques et traditionnelles, la qualité des produits dérives et leurs prix.

2. Région d’étude : L’enquête a été menée auprès des herboristes des deux villes principales de la région Tanger-Tétouan située au nord du Maroc. Il s’agit de Tanger et Tétouan.

3. Objectifs : Les principaux objectifs de cette enquête sont : Valoriser les PAM d’origine du Nord du Maroc. Évaluer la valeur économique de ces plantes. Savoir la situation du marché de ces plantes au niveau régional.

IV. La plante à étudier : 1. Généralités : Laurus nobilis L., membre de la famille des lauracées qui renferme 32 genres et environ 2000-2500 espèces {36}. Laurus, nom latin, d’origine celte qui veut dire « toujours vert » allusion au feuillage persistant de la plante {37}.

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Étude Bibliographique

Les feuilles sont largement appliquées et connues comme assaisonnement et herbe médicinale depuis les périodes antiques grecs et romain {38}. Il est intéressant de noter que cette herbe, qui était pendant longtemps employée dans la nourriture comme condiment et en médecine traditionnelle, a des propriétés qui peuvent suggérer de nouvelles applications {39}.

2. Origine et distribution: Originaire du bassin méditerranéen, Laurus nobilis pousse dans les lieux humides et ombragés, mais également dans les jardins, où elle est cultivée comme condiment {40}. Actuellement, dans beaucoup de pays tels que la Turquie, l’Algérie, la France, la Grèce, le Maroc, l’Amérique centrale et les États-Unis Méridionaux, la plante est largement cultivée comme plante ornementale et pour la production commerciale {38,36}.

3. Description botanique: Laurus nobilis, Arbuste ou arbre aromatique de 2 à 10m de haut à tige droite grise dans sa partie basse et verte en haut. Ses feuilles sont alternés, coriaces, légèrement ondulées sur les bords, longues de 16 cm sur 8 cm de large, persistantes vert foncé et glacés sur leur face supérieure et plus pale en dessous. Les fleurs sont dioïques (petites fleurs mâles et femelles sur des pieds séparés), jaunes, groupées par 4 à 5 en petites ombelles. Le fruit est une petite baie ovoïde de 2cm de longueur sur 1cm de largeur, noir vernissé à maturité {40, 38,41}.

Rameau Feuille

Fruit

Fleur

Figure 4 : Aspect morphologique de Laurus nobilis {41}.

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Étude Bibliographique

4. Classification botanique: Le Tableau 2 illustre la classification botanique de Laurus nobilis L. Tableau 2 : Classification botanique de Laurus nobilis L {42}. Règne

Plantes

Sous règne

Plantes vasculaires

Embranchement

Spermaphytes

Sous embranchement

Angiospermes

Classe

Dicotylédones

Sous classe

Dialypétales

Ordre

Laurales

Famille

Lauracées

Genre

Laurus

Espèce

Laurus nobilis L.

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Matériel et Méthodes

Chapitre 2 Matériel et Métho thodes

I. Matériel Biologi ogique: 1. Matériel el végétal La plante du laurier noble a été récoltée la 25 mai 2016 à partir dee la l région de Moulay Abdeslam, au nord du Maroc. Les feuilles de cette plantee est es la partie végétale choisie pour l’extraction. n.

Figure 5 : Situati ation géographique de la région de la récolte {43}. {

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Matériel et Méthodes

2. Matériel microbiologique Les souches utilisées dans notre étude font partie des groupes des microorganismes pathogènes. Les souches bactériennes utilisées dans notre travail proviennent de l’Équipe de Recherche en Biotechnologies et Génie des Biomolécules de la FST de Tanger. Elles sont présentées et caractérisées dans le Tableau 3. Tableau 3 : Les souches bactériennes testées.

Les souches

Principales caractéristiques

Escherichia coli

Bacille à Gram -

Salmonella Seftenberg

Bacille à Gram -

Staphylococcus aureus

Coque à Gram +

Enterococcus faecium

Coque à Gram +

II. L’extraction d’huile essentielle : Les feuilles sont séparées minutieusement de leurs pédoncules et nettoyées. Elles sont mises par la suite à sécher dans l’étuve pendant 48 heurs à 40˚C. Après séchage, 100g de feuilles séchée ont subit une hydro-distillation. L’extraction de huiles essentielles a été effectuée à l’aide d’un hydro-distillateur de type Clevenger. L’hydro-distillation est arrêtée après 3 heures. L’huile est conservé dans des tubes de verre fermés hermétiquement et couverts par un papier aluminium pour la préserver de l’air et de la lumière et mise à 4˚C dans un réfrigérateur à l’obscurité jusqu’au l’analyse chimique de leurs composants et l’évaluation de leurs activités.

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Matériel et Méthodes

Figure 6 : Mo ontage d’hydro-distillation du type Clevenger er :

III. Détermination d’humid idité et du rendement en huiles essent ntielles : 1. Calcull d’humidité d : Le taux d’humidité, danss notre n échantillon, à été déterminé par le procé océdé de dessiccation à une température de 105° C pen endant 24 heures dans une étuve jusqu'à l’obtention l’o d’un poids constant. Après refroidissementt dans d un dessiccateur, la moyenne des pertess en e poids est calculée et le taux d’humidité est détermin iné par la relation suivante :

H(% %) = (MF-MS)/MS×100 Avec: MF: Matière Fraîche (g). H(%): taux d’humidité. MS: Matière Sèche (g)

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Matériel et Méthodes

2. Calcul du rendement en huile essentielle : Le rendement de l’huile essentielle des différentes provenances est calculé par rapport à la matière totale sèche par la relation :

R(%) =MH.E/MS×100 Avec: R: Rendement en huile essentielle en pourcentage (%). M H.E: Masse de l’huile recueilli (g). MS : Matière sèche en (g)

IV. Analyse chimique du H.E par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CPG/ SM) : La séparation et l’identification des différents composés chimiques du H.E extraite des feuilles de Laurus nobilis a été réalisée par la chromatographie en phase gazeuse (Ultra GC Trace), couplée à un spectromètre de masse de type (PolarisQ) à l’unité d’analyse GC/MS et GC, Trappe d’ions en mode impact électronique avec une énergie d’ionisations de 70 eV. La colonne utilisée est une colonne capillaire apolaire en silice. Le volume de l’échantillon injecté est de 1 µl de l’huile diluée dans l’hexane. En combinant les deux techniques, on obtient les spectres de masse des différents composés des échantillons des huiles essentielles. L’identification des composants des huiles essentielles est réalisée en comparant leurs temps de rétention et leurs spectres de masse avec ceux dans la base de données.

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Matériel et Méthodes

1

2

3

Figure 7 : Chromatographie en Phase Gazeuse Couplée à la Spectrométrie ie de d Masse (GC/MS)

1 : Spectrométrie de masse sse 2 : Chromatographie en phase ph gazeuse 3 : Lien informatique

V. Indices physico-ch chimiques : Pour obtenir des données es sur la composition et le degré de pureté dee l'huile l essentielle et, dans certains cas, pour l'identifier ier, on procède à l'étude de ses propriétés physiq sique et chimique. Dans cette étude, les mét éthodes d'analyse physico-chimique (proprié riétés organoleptiques, pH, indice d'acide, pouvoir rotato atoire, indice de réfraction), des H.E extraites ont on été réalisé suivant les protocoles expérimentaux édic dictés par l'association Française de Normalisat sation {12}.

1. Les propri riétés organoleptiques : Il s’agit des caractéristiq tiques d'un critère d'un produit pouvant être apprécié a par les sens humains (toucher, saveur, odo dorat). Les différentes caractéristiques organole oleptiques de l'essence de Laurus nobilis prise en comp mpte sont: aspect, couleur et odeur.

2. Le PH : La mesure l'activité chimiq mique des ions hydrogènes (H+) en l'H.E extrai trait a été établie par le biais d'un pH-mètre.

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Matériel et Méthodes

3. Indice d’acide : La détermination de l'indice d'acide renseigne généralement sur le degré d'hydrolyse. Les H.E ne contiennent pas d'acide gras libre à courte chaine carbonique (voir négligeable). Ce paramètre est une variable qui dépend essentiellement des conditions de conservation et surtout des conditions d'extraction. L'indice d'acide (la), est le nombre de milligrammes d'hydroxyde de potassium (KOH) nécessaire pour neutraliser les acides libres renfermés dans (01) grammes d'H.E. Cette neutralisation par (KOH) se traduit par la réaction chimique suivante :

O

O

+

R-C

KOH

+

R-C

OH

H2O

OK

Le protocole expérimental de la détermination de l'indice d'acide est le suivant: 1g d'H.E ,5mL d'éthanol à 95 % et environ 3 gouttes d'indicateur coloré (phénophtaléine) sont introduits dans une fiole. Le mélange ainsi formé est titré par une solution éthanolique de potasse (KOH) (0,1N) jusqu'à ce que la couleur du mélange vire à une couleur rose. L'indice d'acide (la) est déterminé par la formule suivante :

Ia = (56, 11×N×V)/m Avec : N : normalité de KOH V : Volume en ml de la solution éthanolique de KOH utilisé pour le titrage. M : masse en grammes de l'huile essentielle.

4. Pouvoir rotatoire : Le pouvoir rotatoire du H.E a été mesure à l’aide d’un polarimètre.

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Matériel et Méthodes

VI. Évaluation de l’activité antioxydante : L’activité anti-oxydante a été évaluée par la mesure du pouvoir de piégeage du radical DPPH. Un millilitre d'une solution de 1mM du radical DPPH dans du méthanol est ajouté dans des tubes contenant 3 ml de différentes concentrations du H.E de Laurus nobilis (1000-100 mg) de méthanol. Après agitation au vortex, les tubes sont maintenus à température ambiante dans l'obscurité pendant 30 min. La mesure de l’absorbance est réalisée à 517 nm en utilisant un spectrophotomètre. La vitamine C (un antioxydant standard) est utilisée comme contrôle positif. Le pourcentage de l’activité du piégeage du radical DPPH est calculé comme suit:

% Piégeage du radical DPPH = [(Acontrol – Atest) / Acontrol] × 100

Avec:

Acontrol :

l’absorbance de la réaction contrôle (contenant tous les réactifs excepté le produit à tester)

Atest : est l’absorbance du produit à tester. VII. Évaluation de l’activité bactérienne du H.E : L'activité antibactérienne des huiles essentielles a été évaluée en utilisant la méthode de diffusion sur disques.

1. Milieu de culture: Dans notre travail nous avons utilisé comme milieu de culture les suivants: Pour l’obtention des souches bactériennes nous avons utilisé le milieu Nutritif Broth (NB) : 13g du milieu déshydraté fondue dans un 1L d'eau distillée. Pour tester l’activité biologique des souches bactériennes nous avons utilisé le milieu gélose Muller Hinton Agar (MHA), Ce milieu est composer de: 2 g d'infusion de viande de bœuf. 17,5 g de peptone de caséine. 1,5 g d'amidon. 17 g d'agar. 38g de ces compositions sont fondues dans 1L d'eau distillée.

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Matériel et Méthodes

2. Obtention des suspensions bactériennes : La remise en culture des souches a été effectuée par ensemencement d’une colonie isolée à partir des boites d’agar nutritif dans 5 ml du milieu NB. Le bouillon a ensuite été incubé 24 h à 37°C.

3. Méthodes de diffusion sur disques : La méthode de diffusion sur disque est utilisée comme test pour une détermination qualitative de l’activité antibactérienne du H.E de Laurus nobilis. Après l’obtention des souches bactériennes 100µl de la suspension bactérienne de chaque souche d’intérêt a été inoculé à la surface d’une boîte de gélose de Muller Hinton Agar (MHA) à l’aide d’un étaloir de façon à avoir une croissance répartie de façon homogène sur toute la boîte. Des disques stériles de papier filtre ont été imprégné avec 15µl du H.E et ensuite placés à l’aide d’une pince stérile à la surface des boîtes de pétri de MHA préalablement ensemencée avec les microorganismes. Les boîtes de Pétri ont été conservées à 4°C pendant 20min pour permettre la diffusion des huiles essentielles. Elles sont ensuite incubées à 37°C pendant 18 à 24 h sauf pour les boîtes inoculées. Les diamètres des zones d'inhibition résultants ont été mesurés en mm. Les tests ont été effectués en double. Les résultats sont exprimés en moyenne de deux déterminations (+/-) écart type.

Croissance bactérienne

Zone d’inhibition

Disque Imbibé par H.E

Figure 8 : Diffusion sur disques

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Résultats et Discussion

Chapitre 3 Résultats et Discussion I. L’enquête : Fiches d’information des herboristes : Durant la période de l’enquête, on a effectué un tour de plusieurs herboristes de la région Tanger- Tétouan et on a organisé les informations sous forme de fiches. Elles sont représentées présentées comme suit :

Herboriste Rass Msalla

Plantes

Extrait / Capsules H.E

H.Végétale

Nom

Type/origine

Usage

Fournisseur

Mode de préparation

Prix/ Type d'emballage

La plus commercialisée

Erica

Arbustive/ De forêt

Médicinale

Bio-vert (ste)

Infusion Décoction/Cru

--------

⁺

Pin

Arbre/ De forêt

Bio-vert (ste)

--------

Arbustive

-------Décoction/ Cuit

--------

Laurier noble

Médicinale Médicinale/ Alimentaire

--------

--------

Erica

--------

Médicinale

Bio-vert (ste)

--------

90dh/boite des capsules

⁺⁺

Pin

--------

Médicinale / Cosmétique

Bio-vert (ste)

--------

10 ml

⁺

Laurier noble

--------

Médicinale

Bio-vert (ste)

--------

10 ml

Laurier noble

--------

Médicinale

Bio-vert (ste)

--------

10 ml

Les huiles les plus commercialisés

Bio-vert (ste)

⁺

Huile d’argan, huile du ricin, huile d'amande

Meilleurs clients La distillation chez l'herboriste

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Jeunes femmes NON

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Résultats et Discussion

Herboriste Marrakech

Herboriste Centre Yasmina

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Herboriste Lalla Chafia

Résultats et Discussion

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Herboriste Traditionnel

Herboriste Kenfaoui

Résultats et Discussion

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Herboriste Laoun de Tetouan

Résultats RésultatsetetDiscussion Discussion

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Résultats et Discussion

Herboriste Centre Omar Nom

Type/Origine

Usage

Fournisseur

Romarin

Errachidia/ Nord

Thérapeutique/ Cosmétique

--------

Sauge

Arbustive/ Spontanée

Cosmétique/ Alimentaire

--------

Romarin

--------

Thérapeutique

Sauge

--------

Cosmétique

Plantes

H.E

Mode de Prix / Type Vérification de Partie utilisées préparation d'emballage la qualité --------

--------

-------Couleur

--------

Tige

--------

Infusion/ Tisane --------

--------

--------

--------

--------

--------

--------

Poudre

Romarin

Meilleurs client

Jeunes femmes

1. Commentaires : On a remarqué qu’il existe une grande différence des prix des plantes médicinales d’un herboriste traditionnel comme ceux que l’on trouve dans les quartiers populaires et ceux qui se vendent par des herboristes cultivés. La qualité de ces plantes intervient dans les prix ainsi que l’aspect du lieu par exemple chez un herboriste moderne on s’aperçoit que les plantes sont conservées dans des boites fermées par contre chez les herboristes traditionnels, ces plantes sont exposées à l’air et à la poussière ce qui altère la qualité de ces plantes.

2. Remarques : On remarque que les prix sont différents même d’un herboriste cultivés à un autre, par exemple, chez l’herboriste Rass Msalla le prix des Capsules de la plante Erica est de 90dh par contre chez l’herboristerie Laoun le prix varie de 100 à 120dh. Pour les huiles, on note que les prix de Le thym et de la camomille sont chers chez certains herboristes, par contre les autres types des huiles sont presque de même prix qui ne sont pas très chers. D’un point de vue régional, on a remarqué que la ville de Casablanca constitue la source principale des fournitures des plantes médicinales et de leurs produits dérivés, alors que dans la région Tanger-Tétouan, on trouve rarement un herboriste qui utilise ses plantes. On note aussi que la plante sèche reste la forme la plus commercialisé malgré la présence des autres dérivés.

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Résultats et Discussion

II. Taux d’humidité et rendement en huiles essentielles : 1. Rendement en huile essentielle : Le rendement moyen de l’huile essentielle, obtenu à partir de la plante Laurus nobilis est exprimé en 1000 ml de distillat pour 100g de matière sèche, exprimé en pourcentage, est de :

0,66 ±0,11 % Par comparaison du rendement en H.E obtenu pour cette plante par rapport à un autre résultat cité dans la littérature scientifique : (OUIBRAHIM et al., 2015), ont obtenu un rendement en H.E de L.nobilis de 0,71%. Ce rendement s’avère en concordance avec le résultat obtenu par notre plante {45}. Cependant, d’après (Haddouchi et al., 2009), ont trouvé un rendement de 1,2% {46}. Cette différence en matière de rendement en H.E de Laurus nobilis, pourrait être due à la forte humidité qui caractérise la région de Moulay Abdeslam Il sachant que les rendements maximaux sont obtenus par temps sec, elle pourrait aussi être due à la période de récolte et la méthode d’extraction employée. Ce sont des facteurs entre autres qui peuvent avoir un impact direct sur le rendement en huile essentielle.

2. Taux d’humidité : Les résultats obtenus ont révélé un taux d‘humidité important compris entre 39% et 51%, cela signifie que approximativement la moitié ou moins de la moitié du poids frais de la plante est constituée par l’eau. Les feuilles du laurier montrent la grande teneur en eau 51%, c'est-à-dire la moitié du poids frais, respectivement la plante totale avec une teneur de 47%, par contre les tiges du laurier ne présente qu’une teneur de 38%.

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Résultats et Discussion

Plante totale tot

Feuilles 49% 9%

53%

Ms

51%

47%

Eau

MS Eau

Tiges 62% MS

38 38%

Eau

Figure 9 : Teneur eur en eau des trois différentes parties de la plante. pla

III. Indices physico-cchimiques : Les résultats des propriété iétés physico-chimiques et les caractéristiques es organoleptiques de l’huile essentielle extraite de la plante pl sont regroupés dans le Tableau 4.

Tableau 4 : Résultats de la détermination des indices physico-chimiq iques des H.E H.E

Laurus nobilis

Aspect

Couleur

Odeur

pH

Indice d’acide

Pouvoir r rotatoire

Liquide mobile limpide

Jaune très pâle

aromatique épicée

5.37

0,561mg KOH/1gd’H.E

-21,66 (°. (°.cm/g.dm)

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Indice de réfraction 1,476

Page 29

Résultats et Discussion

Les résultats du Tableau 4 indiquent que les H.E de L.nobilis est liquide, de couleur jaune très pâle aromatique, ayant un pouvoir rotatoire de -21,66°.cm/g.dm et un indice de réfraction de 1,476. Selon Afnor (2000) les huiles essentielles sont habituellement liquides odorants à température ambiante, volatiles, et légèrement acide, ce qui les différencie des autres huiles végétales. Elles sont plus ou moins colorées, le pouvoir rotatoire du Laurus nobilis varie du (-10) à (-22). Les résultats des caractéristiques organoleptiques, de pouvoir rotatoire, d’indice de réfraction et de pH, obtenus pour l’H.E Laurus nobilis sont donc conforme à celle édictées par la norme d’Afnor (2000). L'indice d'acide indique le comportement de la quantité des acides libres présents dans l'H.E. Il peut aussi nous renseigner sur la susceptibilité de l'huile à subir des altérations, notamment l'oxydation. D'après les résultats du Tableau 4 : l'H.E de L.nobilis

a présenté

respectivement une valeur égale à 0,561mgKOH/1g d'H.E. Cette valeur obtenue, est très inférieure par rapport à celles préconisées par la norme d’Afnor (2000), qui est de l'ordre de 4,5 à 6,5mgKOH/1g. L’écart remarqué pour la valeur de l'indice d'acide de H.E de L.nobilis par rapport aux valeurs promulguées par la norme d’Afnor (2000), peut être expliqué par la méthode de conservation de plante, sa durée de stockage, la composition chimique de sa H.E, des éventuelles réactions phytochimiques lors de l'hydrodistillation, … etc. Ce sont des facteurs entre autres qui peuvent avoir des influences sur le comportement et les caractéristiques des H.E. En effet, un stockage de la plante pendant 24 heures suffit pour induire des changements sensibles de composition d'H.E {47}. Au cours de l'hydrodistillation, l'eau, l'acidité et la température peuvent induire des réactions : d'hydrolyses, hydratations et cyclisation, mais aussi réarrangements, isomérisations, oxydations, … etc. et ce d'autant plus que la distillation est longue et le pH acide {48}. Toutes ces observations montrent les difficultés que l'on peut rencontrer lors de la préparation et de la conservation des huiles essentielles.

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Page 30

Résultats et Discussion

La détermination des propriétés physico-chimiques est une étape nécessaire mais non suffisante pour caractériser les huiles essentielles. Il est donc nécessaire de la compléter par des analyses chromatographiques « CG/SM ». Ces dernières sont souvent utilisées comme moyen analytique complémentaire pour l'analyse structurale des substances volatiles, elles ont été employées pour identifier qualitativement l'H.E de Laurus nobilis.

IV. Analyse de la composition chimique de l’huile essentielle : La composition chimique de l’huile essentielle de Laurus nobilis a été déterminée par la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS) conformément aux indices de Kovats et en comparant avec les données de la bibliothèque NIST.

Le Tableau 5 représente les différents constituants chimiques identifiés de l’H.E. Les composés fondamentaux et majoritaires apparaissent en gras. L’analyse de l’H.E a permis de mettre en évidence 25 substances dominées par la présence de 1,8 Cineole (42%),Caryophyllene (11,74%),α -Terpinyl acétate (9,98%), ce qui représente 89,42% de l’huile. Par comparaison de la composition chimique de notre échantillon à celle décrite par : (OUIBRAHIM et al., 2015) {45}, pour l’H.E originaire de l’Algérie, on constate que le 1,8 Cineole reste toujours le constituant majoritaire avec une teneur de 35,31%. Par ailleurs, cet échantillon ressort une teneur considérable en β-Linalol 22,52%, et en Camphene 7,37%. Nos résultats concordent aussi avec ceux rapportés par (Mediouni Ben Jemâa et al., 2012) {39}, qui ont démontré que les principal composé commun des H.Es de laurier provenant de l’Algérie, de la Tunisie et du Maroc est

le 1,8-Cinéole. (Marzouki et al., 2009) {40} ont

également signalé que les H.Es de L. nobilis cultivé en Tunisie et en Algérie n'ont pas révélé de différences dans leur composition chimique. En outre, (Ozcan et Chalchat, 2005) {41} soulignent que la variation quantitative et qualitative des huiles essentielles de L. nobilis concerne principalement les composés mineurs. La composition chimique des H.Es est influencée par des facteurs géographiques, bioclimatiques ainsi qu’aux conditions de récolte et de stockage de la plante {42,43}.

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Page 31

Résultats et Discussion

Tableau 5 : Composition chimique (en %) des différents composés identifiés l’H.E étudiée

Temps de rétention(min)

Abondance(%)

7,65

2,59

8,05

0,24

8,70

4,64

8,82

1,99

9,11

0,32

9,71

0,53

9,88

0,40

10,13

0,19

10,38

42

11,08

0,79

12,20

0,72

14,23

0,58

14,53

1,73

Myrtenol

14,91

2,69

δ -Elemene

18,31

0,25

19,20

9,98

19,44

3,63

Methyl eugenol

20,33

0,64

Caryophyllene

20,60

11,74

21,12

0,36

Composants α-Pinene Camphene Sabinene β -Pinene α -Phellandrene 3-Carene p-cymene Limonene 1,8-Cineole cis-Sabinene hydrate Linalool Terpinen-4-ol α -Terpineol

α -Terpinyl acetate Eugenol

trans-α -Bergamotene

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Résultats et Discussion

β -Elemol Spathulenol β -Eudesmol α -Eudesmol Cis-Farnesol

23,60

0,31

24,27

1,83

26,19

0,20

26,35

0,23

26,71

0,83 89,42%

V. Activité anti-oxydante : On remarque expérimentalement, le changement de couleur de la solution du DPPH de la coloration violet intense à une coloration jeune pâle, cela montre déjà la présence d’une activité anti-oxydante. Notre série de dilution est analysé par un spectrophotomètre à une longueur d’onde de 517nm, les résultats sont présentés dans le Tableau 6. Tableau 6: L’activité anti-oxydante de l’H.E Concentration (mg/l) 1000 500 250 100

L’absorbance en 517nm 0,257 0,618 1,21 1,71

% Piégeage du radical DPPH

87,98 % 71,10 % 43,43 % 20,05 %

Ecartype 0,08 0,03 0,04 0,06

Tableau 7: L’activité anti-oxydante de la Vitamine C Concentration (Mg/L) 1000 500 250 100

L’absorbance en 517nm 0,083 0,086 0,095 0,097

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% Piégeage du radical DPPH 96,11% 95,97% 95,55% 95,46%

Ecartype 0,0026 0,0037 0,0043 0,0049

Page 33

Résultats et Discussion

Les résultats du Table bleau 6 et Tableau 7, montre que le pourcent entage de piégeage du radical DPPH s’accentue avecc l’augmentation l de la concentration soit pour po l’antioxydant de comparaison, La vitamine C, ou u pour p l’huile essentielle. D’ailleurs, l’activité anti-oxydante an de l’H.E de Laurus nobilis est inférieure in à celui de la vitamine C pour toutes les conce ncentrations utilisées. Or, pour les concentratio ations de 1000Mg/L et 500Mg/L en huile essentielle le % de piégeage du radical DPPH dépasse 87% %. Pour toutes les concen centrations utilisées, La vitamine C, s’impos pose avec un pouvoir antioxydant élevé comparé à celle cel de L’H.E, ce pouvoir est de 96,11% à une u concentration de 1000Mg/L.

Piégeage du radical DPPH%

120,00% 100,00% 80,00% 60,00% Laurus nobilis

40,00%

Vitami C Vitamine 20,00% 0,00% 1000

500

250

100

Concentration (Mg/L) Concentration (Mg/l)

Figure 10 : Activité antioxyda ydante de l’huile essentielle de L.nobilis compa parée à celui de la vitamine C à des d concentrations allant de 100 à 1000 Mg/L g/L

VI. Activité antibactérie rienne : La méthode de diffusion on des disques en agar nous a permis de mettre me en évidence le pouvoir antibactérien d’huile esse ssentielle du Laurus nobilis L vis-à-vis quatre souches so bactériennes.

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Résultats et Discussion

D’après la Figure 11 nous constatons que l’huile essentielle du Laurus nobilis a présenté une certaine activité modérée dont les diamètres des zones d’inhibitions n’ont dépassé 24,45 mm.

Diamètre de zone d'inhibition (mm)

30 25 20 Escherichia coli 15

Salmonella Seftenberg Staphylococcus aureus

10 Enterococcus faecium 5 0 Les souches testées

Figure 11 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis L sur les souches testées.

Les résultats du test de sensibilité microbienne à l’huile essentielle sont regroupés dans le Tableau 9. Les valeurs indiquées sont les moyennes de deux mesures.

Tableau 9 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du L. nobilis sur les souches testées. Les souches testées

Diamètres de la zone d’inhibition (mm)

Sensibilité à l’huile essentielle de Laurus nobilis L

Escherichia coli

24,45 ± 3,18

+

12,6 ± 3,67

+

18,9 ± 0,98

+

9,6 ± 0

-

Salmonella Seftenberg Staphylococcus aureus Enterococcus faecium (+) sensible, (-) résistant

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Résultats et Discussion

Tableau 8 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis L sur les souches bactériennes testées.

Escherichia coli

Staphylococcus aureus

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Salmonella Seftenberg

Enterococcus faecium

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Résultats et Discussion

A partir des résultats obtenus, on peut observer le pouvoir antibactérienne d’huile essentielle du Laurus nobilis L le plus élevé a été contre Escherichia coli dont le diamètre, d’environ 24,45 ± 3,18mm, les autres souches Staphylococcus aureus, Salmonella Seftenberg, Enterococcus faecium, ont des diamètres des zones d’inhibitions moins de 19 mm, 18,9 mm ; 12,6 mm et 9,6 mm respectivement. Il est difficile de comparer les résultats obtenus dans les différentes études sur l’effet antimicrobien des huiles essentielles en raison de la diversité des méthodes et des conditions appliquées.

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Conclusion et perspectives

Conclusion et perspectives Dans le présent travail, on s’est intéressé à la valorisation des plantes médicinales et aromatiques au Nord du Maroc, plantes très utilisées en médecine traditionnelle, et qui sont déjà exploitées par la population du Nord. Dans une première partie, on a réalisé une enquête sur les herboristes de la ville de Tanger et Tétouan, et comme résultat on a constaté que la majorité d’entre eux n’utilisent pas les plantes de la région malgré sa richesse en plantes médicinales et aromatiques. Dans une deuxième partie, on a réalisé une étude des indices physico-chimiques, de composition chimique, de pouvoir antioxydant et pouvoir antibactérien du produit obtenu, à partir de l'extraction par hydrodistillation de Laurus nobilis cueilli de la région de Moulay Abdeslam. L’étude quantitative a révélé que l’huile essentielle obtenue à partir de L.nobilis représente 0,66 ±0,11%. L’étude qualitative par CG/SM, de constituants chimiques a permis l’identification de 25 composés dominés par le 1,8-cineole 42%. L’étude de l’activité antioxydante a révélé que l’extrait méthanolique de l’huile essentielle de Laurus nobilis est actif comme piégeur du radical DPPH. L’étude de l’activité antibactérienne de cette huile essentielle de laurier sur des souches de bactéries gram positif et gram négatif montre que ces huiles possèdent une activité antibactérienne surtout contre le E.coli et Staphylococcus aureus.

En terme de perspective et à la suite des résultats obtenues, il serait intéressent de mener une suite plus détaillée de l’enquête dans les autres villes de la région du Nord de Maroc, en vue de bien évaluer l’état des PAM d’origine du Nord. Les résultats de ce travail peuvent être complétés aussi par : La réalisation des tests antibactériens sur une large gamme de microorganismes ;

L’étude de l’effet insecticide et antifongique de l’huile essentielle de L.nobilis ; L’étude de l’effet de la zone géographique, la période de récolte et la méthode de conservation sur le rendement et la composition chimique de l’H.E ; L’extraction de laurier à l’aide des solvants organiques, pour but de la comparaison de différentes activités biologiques de ces extraits à celles obtenues par hydro-distillation.

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Annexes

Annexes

Annexe 1 : Questionnaire pour l’enquête

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Annexes

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Annexes

Annexe 2 : Chromatogramme de l'huile essentielle de Laurus nobilis.

RT: 0,00 - 38,80 SM: 7B NL: 2,20E8 TIC MS laurier

10,38

100 90 80

Relative Abundance

70 60 50 40 20,60 30 20

8,70 14,91

10 3,14

0 0

25,00

5,72 5

30,41 10

15

20 Time (min)

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25

30

34,87 35

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