Kiem Dinh Peni-Strepto-gui SV [PDF]

Zitiervorschau

HƯỚNG DẪN THỰC TẬP

Kiểm định kháng sinh Penicillin & Streptomycin Bộ môn Hóa Dược Khoa Dược, Trường Đại học Nguyễn Tất Thành 1

Nội dung bài thực tập ▪ Định tính các Penicillin • Phản ứng định tính chung

• Phản ứng định tính phân biệt • Phản ứng với H2SO4 đậm đặc • Phản ứng với formaldehyd/H2SO4 • Phản ứng với thuốc thử Fehling

▪ Kiểm định Streptomycin sulfat • Định tính • Phản ứng của nhóm guanidin, nhóm streptose, gốc sulfat

• Định lượng • Phương pháp UV

2

1. Định tính các Penicillin Quan sát cấu trúc:

3

1. Định tính các Penicillin 1.1. Phản ứng định tính chung ▪ Lấy vài tinh thể của chế phẩm, cho lên mặt kính đồng hồ hay chén sứ. ▪ Thêm 1 giọt dung dịch có chứa 1ml dung dịch hydroxylamin hydroclorid 1N và 0,3 ml dung dịch NaOH 1N. Trộn đều. ▪ Sau 2 – 3 phút, cho vào hỗn hợp một giọt dung dịch acid acetic 1N. Trộn thật kỹ. Thêm 1 giọt dung dịch Cu (II): cho tủa màu xanh ngọc. 4

1. Định tính các Penicillin 1.2. Phản ứng định tính phân biệt 1.2.1. Phản ứng với H2SO4 đậm đặc ▪ Cho một ít chế phẩm vào ống nghiệm (khô), làm ẩm với 1 giọt nước → thêm 2 mL H2SO4 đậm đặc (tủ hood) → lắc đều và quan sát màu của dung dịch [đun cách thủy nếu cần]: • Penicillin G → màu vàng nhạt • Penicillin V → màu vàng cam • Ampicillin → màu vàng chanh 5

1. Định tính các Penicillin 1.2. Phản ứng định tính phân biệt 1.2.2. Phản ứng với formaldehyd/H2SO4 ▪ Cho một ít chế phẩm vào ống nghiệm (khô), cho 1 mL thuốc thử formaldehyd/H2SO4 (pha sẵn, trong tủ hood), lắc nhẹ [đun cách thủy nếu cần] • Penicillin G → màu nâu đỏ • Penicillin V → màu đỏ thẫm • Ampicillin → màu vàng nhạt 6

1. Định tính các Penicillin 1.2. Phản ứng định tính phân biệt 1.2.3. Phản ứng với thuốc thử Fehling ▪ Cho vài tinh thể chế phẩm vào ống nghiệm, thêm 1ml nước lắc đều. ▪ Sau đó thêm 2 ml hỗn hợp gồm 2 ml thuốc thử Fehling và 6 ml nước. - Penicillin G: cho xanh thẫm. - Penicillin V: cho màu xanh. - Ampicillin: cho màu đỏ tím 7

1. Định tính các Penicillin 1.2. Phản ứng định tính phân biệt 1.2.3. Phản ứng với thuốc thử Fehling Ampicillin Penicillin V Penicillin G

8

2. Kiểm định Streptomycin sulfat Quan sát cấu trúc:

.3 H2SO4

2

9

2. Kiểm định Streptomycin sulfat Phản ứng do nhóm guanidin

10

2. Kiểm định Streptomycin sulfat Phản ứng do nhóm streptose

11

2. Kiểm định Streptomycin sulfat Phản ứng do nhóm sulfat (gốc muối sulfat)

Ba2+ + SO42-→ BaSO4

12

2. Kiểm định Streptomycin sulfat 2.1. Định tính 2.1.1. Phản ứng do nhóm guanidin ▪ Lấy một ít chế phẩm, cho vào ống nghiệm → thêm 1 mL NaOH 30%→ đặt trên miệng ống nghiệm một giấy pH đã thấm ướt → đun sôi : hơi bốc lên làm giấy pH hóa xanh

13

2. Kiểm định Streptomycin sulfat 2.1. Định tính 2.1.2. Phản ứng do nhóm streptose ▪ Lấy một ít chế phẩm, cho vào ống nghiệm → thêm 1 mL NaOH 1 N → đun cách thủy sôi 5 phút : dung dịch có màu vàng ▪ Để nguội, thêm 1 mL phèn sắt amoni trong H2SO4 2 N (pha sẵn) : dung dịch có màu tím (Có thể sử dụng dung dịch A trong phần định lượng để làm) 14

2. Kiểm định Streptomycin sulfat 2.1. Định tính 2.1.3. Phản ứng do nhóm sulfat ▪ Lấy một ít chế phẩm, cho vào ống nghiệm → thêm 5 mL nước và 1 mL HCl 10% → + 1 mL BaCl2 : tủa trắng tạo thành

15

2. Kiểm định Streptomycin sulfat 2.2. Định lượng Nguyên tắc ▪ Thủy phân Streptomycin sulfat → Maltol giải phóng tạo màu với muối sắt (III). ▪ Đo cường độ màu ở bước sóng 535 nm.

16

2. Kiểm định Streptomycin sulfat 2.2. Định lượng Thực hành Pha dung dịch A ▪ Cân chính xác khoảng 70 mg chế phẩm, cho vào bình định mức 100 mL, hòa tan với 10-20 mL nước, sau đó bổ sung nước vừa đủ 100 mL → dung dịch A

17

2. Kiểm định Streptomycin sulfat 2.2. Định lượng Thực hành

Lấy chính xác 20 ml dung dịch A cho vào bình định mức 50 ml, thêm 5 ml dung dịch NaOH 1N, đun cách thủy sôi trong 30 phút, để nguội. Thêm 5 ml dung dịch phèn sắt amoni 4% trong H2SO4 2N, thêm nước vừa đủ 50 ml. Trộn đều, để yên 15 phút. Làm mẫu trắng trong cùng một điều kiện như trên, nhưng thay 20 ml dung dịch A bằng 20 ml nước cất. Dùng mẫu trắng chỉnh về 0 khi đo quang. 18

2. Kiểm định Streptomycin sulfat 2.2. Định lượng Tính toán kết quả ▪ Nồng độ streptomycin tính bằng g/mL a = 594.E – 5 ▪ Hoạt lực của streptomycin (g/mg)

a × 250 p p: trọng lượng mẫu thử lấy ban đầu tính bằng mg. E: mật độ quang của dung dịch cần đo

19

Câu hỏi tự học ▪ 1. Đề nghị cơ chế phản ứng giữa Ampicillin với thuốc thử Fehling.

▪ 2. Tại sao phải dùng phèn sắt amoni trong H2SO4 khi định lượng streptomycin sulfat bằng phương pháp hóa lý. ▪ 3. Giải thích phản ứng định tính chung các penicillin với hydroxylamin. ▪ 4. Độc tính và chỉ định chính của streptomycin. ▪ 5. Đề nghị phương pháp định lượng penicillin. 20