Planning de TP de Microbiologie [PDF]

Zitiervorschau

Planning du déroulement de la première séance des TP de Microbiologie alimentaire

Jour 1 Lundi

Jour 2 Mardi

Pour CF et CT, E. coli Préparation des milieux de culture et stérilisation du matériel nécessaire : Stérilisation des boîtes de Petri, des cônes de 0,1 ml et de 1 ml (pour tous les germes) Préparation des milieux suivants : VRBL (Pour les CF et CT). Préparation du diluant (Eau Peptonnée Tamponnée: flacon de 90 ml et tubes à essai contenant 9 ml). Préparation de la gélose EMB.. Préparation de la gélose inclinée de Citrate de Simmons. Stérilisation des tubes à hémolyse. Préparation des dilutions et

Staphylococcus aureus  Préparation de 90 ml de diluant et des tubes à essai de 9 ml de (EPT).  Préparation de la gélose de Baird Parker et stérilisation.  Stérilisation des tubes à hémolyse.  Préparation de Bouillon Cœur Cervelle (10 ml) et stérilisation.

Le genre Salmonella -Préparation de 90 ml d’EPT -Bouillon Rappaport Vassiliadis (des tubes de 10 ml). Préparation Gélose inclinée de Citrate de Simmons.

Listeria monocytogenes - Préparation de bouillon Fraser demi et stérilisation (90 ml pour chaque aliment). - Préparation des tubes de 10 ml de bouillon Fraser. - Préparation de la gélose (Oxford).

GAM et levure ASR LAB et Moisissures Préparation du Préparation Préparation milieu PCA. du milieu du milieu Préparation de TSC. MRS. diluant (90 ml) et des tubes de 9 ml.

Préparation des dilutions.

Préparation de la suspension mère

Préparation de la suspension mère

Ensemencement de 1 ml des

Préparation du milieu OGA

Ajouter le Préparation supplément et des dilutions

Ensemencement des BP avec VRBL, incubation pdt 48h (30 et 45 °C).

-

-

Ajout de la solution de jaune d’œuf et de tellurite de potassium au milieu BairdParker, et couler en BP. Ensemencement en surface de 0,1 ml des dilutions. Incubation à 37 °C pdt 48h.

Jour 3 Mercr edi

Jour 4 jeudi

Dénombrement Vérification d’E. Coli Repiquage de quelques colonies de CF sur EMB et incubation pendant 24h à 37°C.

Coloration de Gram des colonies caractéristiques. Repiquage des colonies caractéristiques dans les tubes de BCC, incubation à 37°C pdt 24h.

(10 g + 90 ml) dans des sacs Stomacher et incubation à 37°C pdt 20h.

10 g + 90 ml de Bouillon Fraser demi avec son supplément) dans des sacs Stomacher et incubation à 30°C pdt 24h

0,1 ml dans 10 ml de RVS Bouillon Rappaport Vassiliadis) et incubation pendant 48 heures à 43°C.

-Ensemencement de 0,1 ml du bouillon demiFraser dans des tubes de 10 ml de Fraser avec son supplément, incubation à 30°C pendant 48h.

dilutions (ensemencement en profondeur), incubation) 30°C pdt 72 h. Ajouter le supplément du milieu OGA ensemencement en surface (incubation à 25 °C pdt 5 jours).

le jaune d’œuf et couler en boite Petri, Ensemencem ent de 0,1 ml des dilutions (Méthode de double couche) et incubation à 37 °C pdt 24h en anaérobiose. Lecture de résultats.

et ensemencem ent en surface. Incubation à 37°C pdt 48h.

Lecture des résultats : Dénombrem ent. Test de Gram. Test de catalase. Repiquage

Jour 5 vendr edi

Jour 6 lundi

Recherche Indole (recherche de l’Indole) : Ajout de 0.5 ml de réactif de Kovacs et lecture de résultats. Lecture des résultats immédiats Recherche de l’utilisation du citrate Ensemencement du milieu Citrate de Simmons, incubation à 37°C pdt 24h. Recherche de l’utilisation du citrate Lecture de résultats.

Mélanger 0,5 ml des tubes BCC avec 0,5 ml de plasma de lapin dans des tubes à hémolyses stériles, incubation à 37 °C pdt 2h. Lecture des résultats. Présence ou absence d’un caillot dans le culot du tube.

des colonies de LAB dans des boites de MRS pour purification (incubation) Un deuxième repiquage et test de Gram et de Catalase.

Préparation de la Gélose SS et la Gélose Hektoen (ne pas autoclaver)

Ensemencement dans des Boîtes de milieu Oxford (enrichissement primaire et secondaire), Ensemencement incubation à 30°C par cadrans sur pdt 48h. la surface de la gélose SS. Et sur la gélose Hektoen Et incubation à 37 °C pdt 48h. Lecture des résultats : Colonies caractéristiques (voir polycopié). Repiquage des colonies suspectes sur GN pour une identification (incubation à

Lecture des résultats : Colonies caractéristiques (voir polycopié) Identification : Coloration de Gram et Test de catalase.

Dénombrement des levures et des moisissures.

Un troisième repiquage (test de Gram et catalase). Préparation des produits pou r les probiotiques: - MRS

37°C pdt 24h)

-

-

-

Jour 7 Mardi

Coloration de Gram.  Recherche urée-indole Ensemencement milieu Uréeindole et

16 tubes à essai stériles PBS stérile 1 L) 128 tubes à essai de l’eau physiolo gique. Préparati on 500ml GN. Stérilisat ion 32 Boites de Petri. Pipette stérile. Cônes bleu et jaune.

Séance 2 : Test Probiotique Voir polycopié

Jour 8 Mercr edi

incubation 24h à 37°C. Recherche de l’utilisation du citrate : Ensemencement du milieu Citrate de Simmons, incubation à 37°C pdt 24h. Lecture de résultat : Voir polycopié.