TP Sol [PDF]

Zitiervorschau

Ministère de l’enseignement supérieur et de la Recherche scientifique Université Abou Bakr Belkaid Faculté de la nature et de la vie de la terre et de l’univers Département de biologie

3ème Année Licence Microbiologie – LMD Dénombrement des micro-organismes à partir du sol. La microflore du sol, ou micro-organismes, remplit des fonctions et des services essentiels : décomposition de la matière organique, recyclage du carbone et de nutriments minéraux (azote, phosphore, potassium) dans le sol, décontamination de sols pollués. La microflore du sol, de taille inférieure à quelques dizaines de µm, regroupe majoritairement des bactéries et des champignons. Le nombre d’espèces et leur abondance varient en fonction du milieu, des caractéristiques du sol et de son usage.

But L’isolement et dénombrement des micro-organismes à partir du sol.

Principe : L’isolement consiste à réaliser a partir d’un échantillon des suspensions dilution. Ces dernières sont ensemencées sur milieu de culture solide. Au terme de l’incubation, les germes contenus dans le sol seront développés. Chaque germe sera à l’origine d’une colonie, le comptage des colonies permet par méthode de calcul simple d’estimer la quantité de germes contenue dans le sol étudié.

Prélèvement et dilution : Le sol est très riche en micro-organismes c’est pour ça on faire cette dilution pour facilité le comptage de ces micro-organismes, lorsque la dilution augmente le pourcentage de colonies diminué. -

10g de sol tamisé est pesé et mélangé à 90ml d’eau distillé la dilution 10 −1 est ainsi réalisée.

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1ml de cette dilution est prélevé et mélangé à 9ml d’eau distillé stérile, la dilution 10 −2 est ainsi réalisée jusqu'à la dilution 10 −8 .

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0.1ml de chaque dilution (10 −1 ,10 −4 et 10 −8 ) est prélevé et ensemencer sur milieu de culture (gélose nutritif), les boites incuber a 37°c pendant 24h.

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. Isolement des bactéries sporulées : Pour la sélection des bactéries sporulées uniquement, un prétraitement thermique (10mn à 80°C) est réalisé, afin de sélectionner les spores bactériennes et d’éliminer toutes les formes végétatives. Les solutions décimales ont été réalisées jusqu’à la dilution 10-7 , et pour chaque dilution un volume de 0,1 ml est étalé en surface sur le milieu Tryptone Glucose Extract Agar (TGEA). Les cultures sont incubées pendant 48 à 72 heures à 30°C dans des boîtes de Pétri à l’obscurité