FT 7 Dénombrement Levures Et Moisissures [PDF]

Zitiervorschau

Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila : M.A.A. FSB/USTHB.

FICHE TECHNIQUE N°7 : Dénombrement des levures et moisissures sur gélose Sabouraud au chloramphénicol.

Utilisation : La gélose de Sabouraud au chloramphénicol est recommandée pour l’isolement des levures et des moisissures, surtout lorsque les prélèvements sont fortement contaminés par des bactéries. Composition : Pour 1 litre de milieu : o o o o

Peptone pepsique de viande ………………………………………….10,0 g. Glucose ………………………………………………………………….20,0 g. Chloramphénicol (agent sélectif) .……………………..……………. 0,5 g. Agar agar bactériologique ………………………………..…………….15,0 g.

pH du milieu prêt à l’emploi à 25°C : 5,7 ± 0,2 (agent sélectif). Principe : La croissance rapide des levures et moisissures est favorisée par la présence des peptones (source d’azote) et du glucose (source d’énergie). Le chloramphénicol, antibiotique thermostable à large spectre antibactérien inhibe le développement des bactéries à Gram négatif et à Gram positif. Le pH acide est défavorable au développement bactérien contrairement aux mycètes. Technique : voir schéma 1) 2) 3) 4)

Préparation des dilutions décimales : voir fiche technique 1. Ensemencement en surface ou en nappe : voir fiche technique n° 5. Incubation : en aérobiose à 25°C pendant 3 à 7 jours avec lecture quotidienne. Lecture : Levures : Colonies moyennes de couleur crème, d’aspect crémeux et de forme semi-bombée. Moisissures : Colonies filamenteuses de couleurs variées selon le type de moisissure 5) Dénombrement : dénombrer séparément les levures et les moisissures dans les boîtes contenant entre 15 et 150 colonies. Faire la moyenne des boîtes pour la même dilution. Appliquer la loi de Kass : N = m x 1/v x 1/D (UFC de levure (ou moisissure)/ml ou gr). N : le nombre d’unités formant une colonie. m : la moyenne des boîtes. V : le volume ensemencé. D : la dilution correspondant aux boîtes choisies.

Remarques : 

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D’autres antibiotiques ou antibactériens peuvent également être additionnés à la gélose Sabouraud pour plus de sélectivité comme la Gentamycine, l’actidionne ou cycloheximide …….. D’autres milieux sont couramment utilisés tel que le milieu OGA : gélose glucosée à l’oxytetracycline. 1

Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila : M.A.A. FSB/USTHB.

1 ml

1 gr

1 ml

Préparation des dilutions décimales

9 ml TSE

Fromage Dilution 10 -1

Dilution 10 -2

Dilution 10 -3 Ensemencement (en surface)

0,1 ml

Incubation 25°C 3-7 jours

.. .. 615 UFC

596 UFC

589 UFC

75 UFC

61 UFC

… 5 UFC

65 UFC

.. .. . . .

. . . 3 UFC

7 UFC

Comptage Des colonies

m1 = 600 UFC

m2 = 67 UFC

m3 = 5 UFC

Dénombrement

Appliquer la loi de Kass N = m x 1/V x1/D. Choisir la moyenne située entre 15 et 150 colonies : 15 < m2