NCh2757 2002 [PDF]

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NORMA CHILENA OFICIAL

NCh2757.Of2002

Productos hidrobiológicos - Determinación de nitrógeno de trimetilamina

Preámbulo El Instituto Nacional de Normalización, INN, es el organismo que tiene a su cargo el estudio y preparación de las normas técnicas a nivel nacional. Es miembro de la INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION (ISO) y de la COMISION PANAMERICANA DE NORMAS TECNICAS (COPANT), representando a Chile ante esos organismos. La norma NCh2757 ha sido preparada por la División de Normas del Instituto Nacional de Normalización, y en su estudio participaron los organismos y las personas naturales siguientes: Biotecmar Servicios, Universidad Católica SS.CC Centro de Estudios, Medición y Certificación de Calidad, CESMEC Ltda. Corthorn Quality Fundación Chile Instituto Nacional de Normalización, INN Inspectorate Griffith Servicio Nacional de Pesca, SERNAPESCA Univ. Católica de Valparaíso, Escuela de Alimentos

Mabel Silva H. Eugenia Barros M. Ximena Parra S. Claudio Ortega F. Marcela Torres V. Laura Avila M. Pilar Soto C. Vanessa Basualto R. Sandra Cortés R. Marisol Concha C.

Esta norma se estudió dentro del marco del Proyecto FDI Optimización de la Certificación de Productos Pesqueros de Exportación, para establecer el método de determinación de nitrógeno de trimetilamina en productos hidrobiológicos.

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NCh2757 Por no existir Norma Internacional en la elaboración de esta norma se ha tomado en consideración el método internacional Association of Oficial Agricultural Chemists, AOAC, Official Method 35.1.17 (971.14), 2000 Trimethylamine nitrogen in seafoods Colorimetric method, siendo no equivalente al mismo al tener desviaciones mayores que consisten en incluir el procedimiento de preparación de muestra, según método AOAC Official Method 35.1.01 (937.07), 2000 Fish and Marine Products - Treatment and Preparation of Sample - Procedure. Los Anexos A y B no forman parte del cuerpo de la norma, se insertan sólo a título informativo. Esta norma ha sido aprobada por el Consejo del Instituto Nacional de Normalización, en sesión efectuada el 29 de Agosto de 2002. Esta norma ha sido declarada Oficial de la República de Chile por Resolución Exenta N°550, de fecha 16 de Diciembre de 2002, del Ministerio de Economía, Fomento y Reconstrucción, publicada en el Diario Oficial del 26 de Diciembre de 2002.

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Productos hidrobiológicos - Determinación de nitrógeno de trimetilamina

1 Alcance y campo de aplicación Esta norma establece el método para determinar el contenido de nitrógeno de trimetilamina como un índice de descomposición química, en productos hidrobiológicos crudos y seco salados.

2 Referencias normativas El documento normativo siguiente contiene disposiciones que, a través de referencias en el texto de la norma, constituyen requisitos de la norma. NCh426/2 Agua grado reactivo para análisis - Especificaciones - Parte 2: Análisis físicoquímico y microbiológico de agua potable, aguas crudas y aguas residuales.

3 Términos y definiciones Para los propósitos de esta norma, se aplican los términos y definiciones siguientes: 3.1 productos hidrobiológicos: productos de las diversas especies marinas o de aguas interiores, frescos o procesados 3.2 trimetilamina, TMA: compuesto químico formado durante el proceso natural de degradación de los productos hidrobiológicos, que es usado como indicador de descomposición o pérdida de frescura y determinado por el procedimiento especificado en esta norma

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4 Principio del método Extracción de trimetilamina mediante ácido tricloroacético, con posterior reacción de color con ácido pícrico en ambiente no acuoso. La intensidad de color obtenido, es proporcional a la cantidad de trimetilamina presente en la muestra, la que se determina por espectrofotometría a una longitud de onda de 410 nm.

5 Aparatos Los equipos que corresponda deben tener mantenimiento, calibración y/o verificación vigente. 5.1 Balanza analítica, con resolución de 0,000 1 g. 5.2 Balanza de precisión, con resolución de 0,01 g. 5.3 Procesador de alimentos. 5.4 Campana de extracción de gases. 5.5 Centrífuga, regulable a velocidad de 2 000 r.p.m. a 3 000 r.p.m. 5.6 Espectrofotómetro UV/Visible. 5.7 Equipo destilador, para determinación de nitrógeno, Kjeldahl. 5.8 Papel filtro Whatman Nº1 o equivalente. 5.9 Pipeta o dosificador automático, de 10 ml, para adición de tolueno. 5.10 Tubos de ensayo, de 20 ml a 30 ml de capacidad con tapa rosca. 5.11 Material de uso habitual en laboratorio.

6 Reactivos y soluciones 6.1 Agua grado reactivo para análisis, clase 2 según NCh426/2. 6.2 Acido clorhídrico, concentrado, HCl, 37% p.a. 6.3 Acido pícrico, C6H3N3O7, p.a. NOTA DE PRECAUCION: Reactivo EXPLOSIVO en estado seco, se debe mantener humedecido con agua. En el envase se declara el % de agua agregado.

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NCh2757 6.4 Acido tricloroacético, CCl3 COOH, p.a. 6.5 Carbonato de potasio, K2CO3, p.a. 6.6 Formaldehído, HCHO, 40% (solución comercial). 6.7 Magnesio carbonato básico, o magnesio hidróxicarbonato, 4 MgCO3 ∙ Mg(OH)2 ∙ 5 H2O, p.a. 6.8 Sulfato de sodio anhidro, Na2SO4, p.a. 6.9 Tolueno p.a. Para mantener el tolueno exento de agua, agregar sulfato de sodio anhidro en relación de 0,5 g/100 ml de tolueno. 6.10 Trimetilamina clorhidrato, TMA, (CH3)3 N ∙ HCl p.a. 6.11 Solución de ácido clorhídrico 1 + 3 en volumen Mezclar una parte de ácido clorhídrico, 6.2, con tres partes de agua para análisis. 6.12 Solución ácido pícrico patrón, 0,2%, en fracción masa/volumen Pesar una cantidad equivalente a 0,2 g de ácido pícrico (ver 6.3) base seca, calculado de acuerdo al contenido de agua declarado en el envase, disolver en 100 ml de tolueno exento de agua (ver 6.9) y agregar 0,5 g de sulfato de sodio anhidro (ver 6.8). 6.13 Solución de ácido pícrico diluida al 0,02%, en fracción masa/volumen Diluir 10 ml de solución 6.12 a 100 ml con tolueno exento de agua (ver 6.9). 6.14 Solución de ácido tricloroacético, 7,5% en fracción masa/volumen Pesar 75 g de ácido tricloroacético (ver 6.4) y diluir a 1 L con agua para análisis. 6.15 Solución de carbonato de potasio Disolver 100 g de carbonato de potasio (ver 6.5) en 100 ml de agua para análisis. 6.16 Solución de formaldehído, 20% en fracción de volumen Agitar 1 L de formaldehído comercial (ver 6.6) con 100 g de carbonato de magnesio (ver 6.7) hasta que quede casi incoloro, filtrar o dejar decantar. Transferir alícuota de 100 ml de filtrado y diluir a 200 ml con agua para análisis.

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NCh2757 6.17 Soluciones para determinar contenido de nitrógeno. 6.17.1 Hidróxido de sodio, NaOH, p.a. 30% a 40% en fracción masa/volumen. 6.17.2 Acido bórico, H3BO3, al 4% en fracción masa/volumen. 6.17.3 Acido sulfúrico, H2SO4, 0,1 N, o ácido clorhídrico, HCl 0,1 N. 6.17.4 Indicador mixto, indistintamente usar 6.17.4.1 ó 6.17.4.2, o equivalente comercial. 6.17.4.1 Rojo metilo - azul de metileno Mezclar dos partes de solución alcohólica de rojo metilo al 0,2%, con una parte de solución alcohólica de azul de metileno al 0,2%. 6.17.4.2 Rojo metilo - verde de bromocresol Mezclar una parte de solución alcohólica de rojo metilo al 0,2% con cinco partes de solución alcohólica de verde de bromocresol al 0,2%.

6.18 Solución patrón de nitrógeno de trimetilamina, N − TMA , 1 mg N − TMA /ml Pesar 0,682 g de trimetilamina clorhidrato (ver 6.10), agregar 1 ml de ácido clorhídrico diluido 6.11 y aforar a 100 ml con agua para análisis, esta solución es estable. Verificar el contenido de nitrógeno de esta solución como se indica a continuación: 6.18.1 Transferir alícuota de 5 ml de solución patrón 6.18 al aparato de destilación Kjeldahl, agregar gotas de fenolftaleína y alcalinizar con solución de hidróxido de sodio 6.17.1, destilar y recibir destilado en ácido bórico al 4% en presencia de indicador mixto 6.17.4. La salida del vástago del destilador debe quedar sumergido en la solución de ácido bórico. 6.18.2 Titular con solución de ácido sulfúrico 0,1 N, o ácido clorhídrico 0,1 N, hasta viraje del indicador. 6.18.3 Calcular concentración de nitrógeno en la solución patrón, considerando que 1 ml de ácido 0,1 N corresponde a 1,4 mg de nitrógeno.

6.19 Solución diluida de nitrógeno de trimetilamina, 0,01 mg N − TMA /ml Agregar 1 ml de solución patrón 6.18 a 1 ml de ácido clorhídrico diluido 6.11 y aforar a 100 ml con agua para análisis.

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7 Procedimiento 7.1 Preparación de la muestra para ensayo 7.1.1 Pescado fresco Limpiar, descamar, eviscerar y homogeneizar durante 60 s como se indica a continuación: a) Pescados de tamaño pequeño ( ≤ 15 cm) En su totalidad. b) Pescados de tamaño mediano Sacar y descartar cabeza, cola, aletas y espinas; cortar en filetes para obtener toda la carne y piel. c) Pescados de tamaño grande De cada uno de más de tres pescados cortar tres rebanadas en sentido transversal de 2,5 cm cada una, la primera rebanada justo detrás de la aleta pectoral; la segunda del medio del pescado, entre la primera rebanada y la abertura anal y la tercera rebanada después de la abertura anal. Eliminar las espinas. 7.1.2 Productos pesqueros congelados Proceder a descongelar a temperatura ambiente no más de 4 h y descartar el drenado, eliminar las espinas y la piel de ser necesario y preparar el homogeneizado del producto en homogeneizador de alimentos. 7.1.3 Productos en salazón Preparar una solución saturada de NaCl y sumergir en ella el producto en salazón algunos segundos, retirar la sal superficial. Sacar de la solución y secar el producto con toalla absorbente, eliminar las espinas, trozar y preparar el homogeneizado de él. 7.1.4 Pescados desecados y salados o ahumados Cortar las piezas de gran tamaño en trozos pequeños, mezclar y fraccionar el conjunto en cuartos sucesivos hasta reducir la muestra a unos 100 g, seguir cortando o triturando hasta obtención de una muestra para ensayo representativa y homogénea.

7.2 Tratamiento de la muestra homogeneizada 7.2.1 Pesar con precisión de 0,01 g en un contenedor apropiado, alrededor de 100 g de muestra homogeneizada, registrar el peso M , agregar 200 ml de ácido tricloroacético al 7,5%, V1 , y agitar aproximadamente durante 10 min.

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NCh2757 En caso de disponer de poca muestra, se debe mantener la proporción de una parte de muestra con dos partes de ácido, considerando un mínimo de 25 g de muestra para el análisis. 7.2.2 Centrifugar la mezcla resultante de 7.2.1 a velocidad de 2 000 r.p.m. a 3 000 r.p.m. hasta que el sobrenadante no presente turbiedad. Alternativamente a la centrifugación, se puede filtrar a través de papel filtro Whatman Nº1 o equivalente. 7.2.3 A un tubo de ensayo con tapa, transferir una alícuota obtenida en 7.2.2, V2 , que contenga entre 0,01 mg y 0,03 mg de N − TMA , en un volumen de 1 ml a 4 ml según el contenido esperado; en caso de tomar una alícuota inferior a 4 ml, diluir a este volumen con agua para análisis.

7.3 Curva de calibración Preparar la curva de calibración, usando los tubos con tapa rosca de acuerdo a Tabla 1: Tabla 1 - Preparación estándares

Identificación tubos, N°

Agua para análisis (ver 6.1), ml

Solución diluida de trimetilamina (ver 6.18), ml

N - TMA *, mg/ml

0

4

0

0,00

1

3

1

0,01

2

2

2

0,02

3

1

3

0,03

*

Concentración nominal de N − TMA , en mg/ml.

7.4 Determinación 7.4.1 A partir de este punto llevar en paralelo estándares y muestras. Agregar a cada tubo las cantidades de reactivos indicadas, en el orden siguiente: -

1 ml solución de formaldehído 20% (ver 6.16);

-

10 ml de tolueno exento de agua (ver 6.9);

-

3 ml solución de carbonato de potasio (ver 6.15).

7.4.2 Tapar el tubo, agitar a mano vigorosamente 40 veces y dejar hasta que se separen las fases.

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NCh2757 7.4.3 En un tubo de ensayo que contenga aproximadamente 100 mg de sulfato de sodio anhidro, adicionar una alícuota de 7 ml a 9 ml de la fase superior orgánica de 7.4.2 y agitar fuertemente para eliminar vestigios de agua de la fase de tolueno. (Evitar remover las gotas de la parte acuosa, fase inferior de la mezcla de reacción). 7.4.4 Transferir una alícuota de 5 ml de solución, 7.4.3 a un tercer tubo de ensayo seco y agregar 5 ml de solución de ácido pícrico, 6.13. 7.4.5 Mezclar y agitar suavemente por rotación; el color obtenido en la reacción es estable. 7.4.6 Leer absorbancia de muestras y estándares de calibración, en espectrofotómetro a una longitud de onda de 410 nm contra el blanco (tubo 0) y calcular la concentración de las soluciones. 7.4.7 Si la absorbancia leída para la muestra, es mayor que la absorbancia del estándar de 0,03 mg de N − TMA , diluir el extracto con solución de ácido tricloroacético y repetir la determinación desde 7.2.3.

8 Expresión de resultados 8.1 Construir curva de calibración graficando absorbancia de los estándares, versus concentración de mg de N − TMA obtenidos en la estandarización de la solución patrón. 8.2 Interpolar la absorbancia correspondiente a la muestra y calcular la concentración de N − TMA , en mg por cada 100 g de muestra, según la ecuación siguiente, (ver 7.2):

N − TMA, mg / 100 g =

(mg

N − TMA) ⋅ V1 ⋅ 100 M ⋅ V2

en que:

mg N − TMA

= mg de N − TMA obtenidos de la curva de calibración;

V1

= volumen de ácido tricloroacético usado en la extracción, expresado en mililitros (ml);

V2

= volumen de alícuota de muestra expresado en mililitros (ml);

M

= masa de la muestra expresada en gramos (g).

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9 Aseguramiento de calidad Es altamente recomendable que el laboratorio disponga de procedimientos escritos para el control de calidad de sus análisis, para asegurar su competencia. En Anexo A se señala lo que se debería incluir en estos procedimientos, entre otros.

10 Informe El informe de resultados debe incluir, a lo menos, la información siguiente: a) Nombre y dirección del laboratorio donde se efectuaron los ensayos. b) Identificación única del informe. c) Nombre y dirección del solicitante. d) Identificación de la muestra. e) Fecha de muestreo. f)

Fecha de recepción de la muestra.

g) Fecha de ensayo de la muestra. h) Identificación del método utilizado. i)

Resultados.

j)

Nombre y firma del responsable.

k) Referencia al Sistema de Calidad y/o acreditación para este método de ensayo si existe, (por ejemplo: en base a NCh-ISO 17025).

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Anexo A (Informativo)

Elementos que debería incluir el aseguramiento de calidad del laboratorio, entre otros A.1 Registro de participación en programas de estudios colaborativos Interlaboratorios, con su respectiva evaluación estadística. A.2 Gráficos de control que demuestren que el método de análisis se encuentra bajo control estadístico.

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Anexo B (Informativo)

Bibliografía [1] JAOAC Journal of AOAC Official Method of Analysis 54, 725 (1971). [2] F.L. Hart and H.J. Fischer, Análisis moderno de los alimentos.

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NACIONAL

DE

NCh

NORMALIZACION

2757.Of2002

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INN-CHILE

Productos hidrobiológicos - Determinación de nitrógeno de trimetilamina Fish and marine products - Determination of trimethylamine nitrogen

Primera edición : 2002

Descriptores:

productos hidrobiológicos, productos determinación de contenido, nitrógeno

pesqueros,

análisis

químico,

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