Determinare Compuși Fenolici [PDF]

Zitiervorschau

Determinarea compușilor fenolici din alimente prin metode spectrofotometrice Metoda Folin Ciocâlteu Principiu Reactivul Folin-Ciocâlteu, este un reactiv complex pe bazǎ de acid fosfomolibdenic și fosfotungstic. În mediu basic, compușii fenolici transferǎ electroni cǎtre molibden formând un complex colorimetrabil albastru a cǎrui absorbanțǎ se poate mǎsura la lungimi de undǎ ȋntre 750 – 765 nm. Mediul bazic este creat de cǎtre soluția de carbonat de sodiu care ajusteazǎ pH-ul ȋn jur de 10. Compușii fenolicii reacționează cu reactivul Folin Ciocalteau numai în condiții bazice (ajustat de o soluție de carbonat de sodiu la pH de 10; MacDonald –Wickes și colaboratorii 2006 ) Metoda se folosește pentru cuantificarea compușilor polifenolici din numeroase alimente de origine vegetalǎ cum ar fi: legume frunzoase și condimente (Fahad Al-Juhaimi and Kashif Ghafoor, 2011), vin (Singleton et al., 1999), cacao (Wollgast, 2004, Jonfia-Essien et al., 2008), tomate (Devanand et al., 2006), vișine (Filimon et al, 2011). Dintre alimentele de origine animalǎ metoda se foloseşte pentru mierea de albine (Măghitaș et al, 2009), etc. Compoziția exactǎ a reactivului Folin-Ciocâlteu nu este cunoscutǎ dar se acceptǎ faptul cǎ el conține un complex acid fosfomolibdenic/fosfotungstic. Mecanismul de reacție se bazeazǎ pe transferul electronilor in mediu bazic de la compușii fenoliciși alte specii reducǎtoare cǎtre molibden formând un complex albastru care poate fi determinat spectrofotometric la lungimi de undǎ ȋntre 750 – 765 nm. Metoda mǎsoarǎ cantitatea de substanța testatǎ care este necesarǎ pentru a inhiba oxidarea reactivului. Deoarece reactivul reacționeazǎ cu orice substanțǎ cu caracter reducǎtor din mediu, nu doar cu fenolii, el determinǎ de fapt capacitatea reducǎtoare totalǎ a materialului testat, nu doar conținutul de compuși fenolici. Ca și standard pentru ȋntocmirea curbei de etalonare se poate utiliza acidul galic (cel mai adesea) sau catechina

Reactivi:

  

Reactiv Folin-Ciocâlteu 2 N Soluție Na2CO3 (75g/l) Etalon (Standard) acid galic, soluție stoc, concentrație 250 mg/L

Mod de lucru Obţinere soluţii de probă Miere Proba constă dintr-o soluție de miere filtrată obținută astfel. Se cântărește, cu precizie de 0,1 mg, o cantitate cât mai apropiată de 5g și se dizolvată ȋn 50 ml apa distilata, urmată de filtrare. 1

Produse vegetale Se obţin extracte de produse vegetale în mod specific prin extracţie apoasă, alcoolică (Metanol, etanol) sau amestecuri de apa: alcool în diferite proporţii. Extractul se testează ca atare sau se dilueaza daca absorbanţa obţinută iese din domeniul curbei de calibrare. Amestecul de reacție: Pentru determinarea fenolilor se iau 0,5 ml filtrat sau extract la care se adaugǎ 2,5 ml reactiv FC concentrație 0,2 N, se omogenizează energic și dupa 5 minute se adauga 2 ml soluție Na2CO3 7,5%. Se citeste absorbanța dupǎ 2 ore la λ=760 nm fața de un blank al reactivilor de care se ţine cont în calcul sau se aduce aparatul la “zero”cu soluţia martor caz în care nu se mai corectează absorbanţa probelor. Întocmirea curbei de etalonare Soluția stoc de acid galic se diluează astfel ȋncât sa avem minim 5 puncte de calibrare ȋntre 0 și 250 mg/L. Un astfel de ex aveti ȋn tabelul de mai jos: Nr eprubet ă 1 2 3 4 5 6 7

Soluție stoc 250 mg/L, ml 0 1 2 4 6 8 10

Curba etalonare Apă distilată, Concentrație Absorbanta ml acid galic, mg/L 10 9 8 6 4 2 0

0 25 50 100 150 200 250

Explicaţi prin calcul valorile trecute pe colana concentraţiilor

În continuare se iau câte 0,5 ml din fiecare soluție preparată ca și mai sus și se parcurg aceeași pași ca și la prelucrarea probelor de miere. Se ȋntocmește o curbă de etaalonare sub forma unui grafic Conc (md/L) = f (absorbanță) utilizând funcțiunile programului EXCEL Ex de curba de etalonare:

2

Etalonation curve, galic acid, F-C 2h 20C

y = 0.01x + 0.0498 R2 = 0.9993

3

Absorbance

2.5 2 1.5 1 0.5 0 0

50

100

150

200

250

300

Conc mg/L

Probe necunoscute Tip proba

Abs proba 1 2 1 2 1 2

Abs Medie

Calcul concentrație probe necunoscute: Se va nota absorbanța obținută pentru probele de miere testate și cu ajutorul curbei de etalonare (ecuația de regresie) se va determina concentrația de acid galic corespunzătoare probelor necunoscute ca și ȋn exemplul de mai jos:

Exprimarea concentrației de fenoli față de mierea de albine sau probe vegetale Ţinând cont de cantitatea de miere de la care s-a pornit precum și de volumul de soluție care s-a analizat se calculează cantitatea de fenoli din probă exprimată ca și echivalenți agid galic (GAE) sub forma mg GAE/100 g miere/ produs vegetal.

3